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酶联免疫吸附实验

一、实验目的

•掌握酶联免疫吸附实验（ELISA）的原理

•熟悉酶联免疫吸附实验的操作方法

•了解其他免疫标记技术

二、实验原理

免疫学分析方法发展很快，特别是在使用

标记了的抗原和抗体的分析技术以后，使原来

许多经典的分析方法在敏感性和特异性方面都

不能相比。继50年代的免疫荧光（IF）60年

代的放射免疫(RIA)分析技术之后，在70年代

初期又建立了用酶来标记抗原或抗体的分析技

术（酶免疫技术）。

免疫标记技术（immunolabellingtechnique）

是指用荧光素、放射性同位素、酶、发光剂或

电子致密物质等作为示踪剂，标记抗体或抗原进行

的抗原抗体反应。

特点：高度灵敏、特异、快速，定性、定量、定位

分类：免疫酶技术、免疫荧光技术、放射免疫技术、

免疫电镜技术、免疫胶体金技术和发光免疫测定。

免疫标记技术=免疫技术+标记技术

免疫技术+标记技术

酶

酶

荧光素

抗原抗体反应示踪物标记荧光素

抗原抗体反应示踪物标记

同位素

同位素

特异性灵敏性

特异性灵敏性

免疫标记技术的主要特点：

高度特异性、高度灵敏性

免疫标记技术

放射物标记技术酶标记技术免疫荧光技术其他标记技术

酶联免疫吸附技术酶免疫组化技术

酶免疫技术(enzymeimmunoassay)

是将抗原和抗体的特异性免疫反应与酶的催化反

应相结合而建立的一种免疫检测技术

就是利用酶标记抗体或抗原，以检测相应抗原

或抗体的一种免疫学标记技术

EE

Ag+AbAgAb

+底物

呈色反应

酶联免疫吸附试验ELISA（enzymelinked

immunosorbentassay）

这样所得的数据要进行校正，校正可按下列公式：

(五）洗涤剂与稀释剂

但每批微量反应板对抗原或抗体蛋白质的吸附性能是有显著差别的

是一类常用的酶免疫技术。是将已知的抗原或抗体吸附在固

核心抗原（HBcAg）和核心抗体（抗-HBc）

相载体表面，使抗原抗体反应在固相表面进行

关于人血清在保存过程中抗体的稳定性报导尚不多

2、内源性过氧化酶的普遍存在，如人脑组织中，呼吸道分泌物的炎症细胞中及某些病毒的组织培养中均有内源性过氧化物酶的活力，

常不易除去，如果用某些方法除去时，则病毒的抗原性亦受到破坏，对于用ELISA检测不利

内分泌方面已经用于检测雌性激素、绒毛膜促性