微生物学--分枝杆菌属-.pptVIP

荧光染色法：（1）涂片：方法同抗酸染色（2）染色：①涂片自然干燥后火焰固定；②滴加染色剂染色30分钟③滴加脱色剂脱色致无色；④滴加复染液复染1-2分钟；⑤镜检。（3）镜检：荧光染色后抗酸杆菌菌体呈黄绿色或橙色荧光。（4）报告：-0条/70视野+-（可疑）70个视野发现1-2条抗酸杆菌1+50个视野发现2-18条2+每10个视野发现4-36条3+每个视野发现4-36条4+每个视野发现36条以上〈三〉分离培养与鉴定1分离培养：分固体培养基培养法和液体培养基培养法（仪器法）〈1〉固体培养基培养法A常用的前处理液为2-4%NaOH、N-乙酰-L-半胱氨酸、苯扎氯铵、草酸。B前处理的目的：痰液液化，杀死杂菌，保留抗酸杆菌。C培养基的选择：罗琴氏培养基D接种：前处理后的标本，接种于两支固体培养基上，每支培养基接种量为0.1ml，要把标本均匀地接种到整个培养基斜面上，然后平置，培养基斜面朝上培养于35℃、5-10%CO2温箱中，24小时后直立。E观察：接种后第一周每天观察一次，以后每周观察一次至第8周，若培养8周，仍未有抗酸杆菌生长者，即可判断培养阴性。如果出现生长缓慢、干燥、呈颗粒状灰白色菌落，涂片染色为抗酸菌阳性则多数是结核分枝杆菌。若菌落有色素产生同时菌落为光滑型，且多不典型，可能为非典型分枝杆菌，则需要接种于24-33℃继续培养至12周，或通过菌型鉴定技术进行鉴定。G报告方式

分枝杆菌培养阴性无菌落生长分枝杆菌菌落数XX个20个菌落以内分枝杆菌培养阳性1+菌落占斜面面积1/4分枝杆菌培养阳性2+菌落占斜面面积1/2分枝杆菌培养阳性3+菌落占斜面面积3/4分枝杆菌培养阳性4+菌落呈菌苔样生长者2液体培养法;就是用液体培养基,利用细菌快速培养仪对结核杆菌的快速培养,不同的培养仪,前处理方法不同,培养基不同,检测原理不同.2鉴定试验：近年来由于AIDS的急剧增加，使得非结核分枝杆菌引起的AIDS合并分结核分枝杆菌病不断出现。因此必须对临床分离出的分枝杆菌做菌种鉴定，为结核病和非结核分枝杆菌病的临床鉴别和防治提供科学依据。〈四〉免疫学检验1结核菌素试验（1）原理：结核菌素有两种，一为旧结核菌素（OT）其中主要成分为旧结核菌素，即结核分枝杆菌蛋白，现已不用。另一种为纯蛋白衍生物（PPD），每0.02μg为1u。注入皮内后如受试者已感染结核，则结核菌素与致敏淋巴细胞特异性结合，在局部释放淋巴因子，形成迟发型超敏反应性炎症，若受试者未被感染过结核则无反应。（2）方法：取5uPPD或OT0.1ml注射于前臂掌侧皮下，经48-72小时检查反应情况。应特别注意局部有无硬结，不能单独以红晕为标准。（3）结果分析：阳性注射部位硬结红肿直径0.5-1.5cm之间。这表明机体曾感染过结核，出现超敏反应，但不表示患结核病；强阳性硬结直径超过1.5cm以上,表明可能有活动性结核,应进一不检查;阴性注射部位有针眼大的红点或稍有红肿,硬结直径小于0.5cm，说明无结核感染，但应考虑下述情况：如受试者处于原发感染的早期，或正患有其它传染病（如寻麻疹、霍奇金病、结节病、爱滋病。）（4）缺陷①特异性低②敏感性较低③导致局部炎症和瘢痕2.抗原检测3.抗结核抗体（IgG）检测4.T-SPOT.TB检测〈1〉鉴别培养基法（手工法）〈2〉PCR反向膜探针杂交ELISA法（PCR杂交法）〈3〉DNA探针〈4〉16SrRNA基因序列测定〈5〉高效液相色谱（HPLC）检测分枝菌酸〈6〉核酸检测用PCR法快速诊断结核分枝杆菌感染〈五〉其它检验方法第二节非结核分支杆菌不产色菌光产色菌暗产色菌一、分类指结核分枝杆菌复合群和麻风分枝杆菌以外的分枝杆菌。又称非典型分枝杆菌。广泛分布于外环境和人及动物的机体中。作为条件致病菌常引起有潜在肺部感染、免疫抑制和开放性外伤患者的感染。不通过人与人进行传播。二、临床意义警钟长鸣——NTM潜在杀手？卫生部关于严重医院感染事件通报—1.关于深圳市某医院发生严重医院感染事件的通报2.卫生部关于安徽省某立医院恶性医疗损害事件的通报3.关于西安交通大学医学院某医院发生严重医院感染事件的通报4.关于山西省太原某中心医院血液透析感染事件的通报5.关于天津市蓟县某院新生儿医院感染事件的通报6.卫生部关于安徽省某县医院血液