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二、血红蛋白的提取和分离的实验操作1.样品处理(1)红细胞的洗涤:洗涤红细胞的目的是去除杂蛋白。采用低速短时间离心,吸出上层透明的黄色血浆,再加入五倍体积的生理盐水,重复洗涤三次,直至上清液中没有黄色,表明红细胞已洗涤干净。洗涤次数过少,无法去除血浆蛋白;离心速度过高和时间过长会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀,达不到分离的效果。(2)血红蛋白的释放:红细胞在蒸馏水和甲苯的作用下破裂,释放出血红蛋白。(3)分离血红蛋白溶液:将混合液进行离心后,会明显看到试管中的溶液的分层情况:第3层的红色透明液体是血红蛋白的水溶液。(4)透析:目的是除去样品中的相对分子质量较小的杂质。2.凝胶色谱操作(1)凝胶色谱柱的装填:①装填前,凝胶用蒸馏水或者洗脱液充分溶胀。②凝胶装填要均匀,色谱柱内不能有气泡,一旦发现存在气泡,必须重装。③装填完后,立即用300mL20mmol/L磷酸缓冲液充分洗涤平衡凝胶,使凝胶装填紧密。(2)样品的加入和洗脱:①加样前,打开色谱柱下端的流出口,使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到与凝胶面平齐,关闭出口。②按正确方法加样,不能破坏凝胶面。③进行洗脱时,等红色蛋白质接近色谱柱底端时,采用试管收集。例2-聚丙烯酰胺凝胶电泳法中加入SDS的作用是()A.增大蛋白质的相对分子质量B.改变蛋白质分子的形状C.掩盖不同蛋白质分子间的电荷差别D.减少蛋白质分子的相对分子质量解析:SDS是阴离子去污剂,作为变性剂和助溶试剂,它能断裂分子内和分子间的氢键,使分子去折叠,破坏蛋白质分子的二、三级结构。在样品和凝胶中加入还原剂SDS后,分子被解聚成多肽链,解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白-SDS复合物,SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量,这样就消除了不同分子间的电荷差异,使电泳迁移率完全取决于分子的大小。答案:C?变式训练2.在利用凝胶电泳法分离蛋白质时,一定要加入缓冲溶液,起到的作用是()A.使酶的活性最高B.使蛋白质的活性最高C.维持蛋白质所带电荷D.使蛋白质带上电荷解析:加缓冲液的目的是维持蛋白质所带电荷不发生改变,而不是使蛋白质带上电荷。答案:C本节小结核心归纳1.凝胶色谱法分离蛋白质取决于相对分子质量的大小,相对分子质量大的路程较短,移动速度快;相对分子质量较小的,路程较长,移动速度慢。2.缓冲液能在一定范围内抵制外界酸、碱对溶液pH的影响,维持pH基本不变。3.电泳时,带电分子会向其所带电荷相反的电极移动。4.蛋白质的提取和分离一般分为四步:样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。5.血红蛋白溶液离心后分为四层,从上到下依次为:无色透明的甲苯层、白色薄层固体(脂溶性物质的沉淀层)、红色透明液体(血红蛋白的水溶液)和其他杂质的暗红色沉淀物。《六月,我们看海去》教学目标1、?组织学生“理解”与“朗诵”作品,在理解、感受的基础上朗诵,在朗诵揣摩的过程中加深理解、感受。?
2、?组织学生“理解”与“朗诵”作品,使学生准确把握作品内容、作品的思想内涵和感情倾向?。教学重点《六月,我们看海去》的内在情感旋律,把握诗作内容,加深理解,寻找传达诗作思想情感的声音形式?。作者和背景潘洗尘是中国20世纪七十年代末八十年代初朦胧诗之后的新生代诗人,作品不多,但却因其独有的诗风格外引人注目。《六月,我们看海去》是潘洗臣的代表作,我们能在其鲜明的诗歌节奏里看到诗人及那个时代一代青年的内心世界。?指导诵读《六月,我们看海去》节奏明快,不能用拖调徐吟的方式来朗诵,要处理好节奏,和着一群风风火火的青年人奔向大海的脚步声来读,甚至可以尝试用现代摇滚乐“说唱”的节奏形式,来表现诗句中那种天然的韵律感。体味诗的思想内容哪些语句借助“听觉想象”体会出青春的活力?(1)“看海去看海去没有驼铃我们也要去远方/小雨噼噼啪啪打在我们的身上和脸上”。鲜明的节奏下我们仿佛听到了一群年青人喧闹的声响和响亮的歌唱,仿佛真地看到了一群朝气蓬勃的青年雀跃着向大海方向奔跑,小雨噼噼啪啪地打在他们的身上和脸上。(2)“我们一群群五颜六色风风火火我们年轻/精力旺盛总喜欢一天到晚欢欢乐乐匆匆忙忙/像一台机械迂回于教室图书馆我们和知识苦恋”。借助“听觉想象”,我们感到了强烈的生命活力,诗歌的节奏把我们引向了对青春情不自禁的赞美,“风风火火”、“五颜六色”、“匆匆忙忙”、“欢欢乐乐”“教室书馆”、“我们和知识苦恋”是典型的青春特征,是青春旺盛生命力的有力见证。哪些语句能强烈地感觉到年轻人的自信?“风撩起我们的长发像一曲《蓝色多瑙河》飘飘荡荡/我们我们我们相信自己的脚步就像相信天空啊”,“我们是一群东奔西闯狂妄自信的
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