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标本中未知肠道感染细菌的分离鉴定程序 直接涂片染色镜检:观察细菌形态、排列、染色性 观察菌落性状、溶血性、色素 血琼脂平板 涂片、染色、镜检 挑取可疑菌落 生化反应测定 纯培养 致病性测定 (凝固酶、耐热核酸酶) 设计性实验 临床标本中病原菌的分离与鉴定 设计性实验 1.脓汁 标本:脓拭子 培养基:血琼脂平板 其他:3%H2O2、兔血浆、生理盐水、革兰染液、玻片等 2.痰 标本:咽拭子 培养基:血琼脂平板 其他:生理盐水、10%胆盐、革兰染液、玻片等 3.尿 标本:尿液 培养基:伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、 动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基 其他:革兰染液、靛基质试剂、玻片等 4.粪便 标本:肛门拭子 培养基:伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、 动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基 其他:生理盐水、靛基质试剂、沙门菌多价血清、志贺 菌多价血清、玻片等 培养基原理 1. EMB平板(伊红美蓝琼脂培养基) 组成:无糖培养基+乳糖+伊红+美蓝 底物 指示剂、抑菌剂 原理: 细菌 乳糖 产酸:伊红+美蓝 紫黑/紫红 结果: 分解乳糖细菌 菌落变黑,有金属光泽 不分解乳糖细菌 菌落无色、半透明(粉色) 2. 靛基质试验(吲哚试验) 组成:蛋白胨水+色氨酸 原理: 分解 某些细菌有色氨酸酶 色氨酸 吲哚(无色)+柯氏 试剂 玫瑰吲哚(红色) 结果:液面形成玫瑰红色 吲哚试验 3. 克氏双糖铁斜面培养基反应试验 组成:无糖培基+1份葡萄糖+10份乳糖+铁盐+酚红 营养 底物 底物 底物 指示剂 原理: 只分解葡萄糖 产酸(葡萄糖少,产酸量少) 分解葡萄糖+乳糖 产酸(乳糖多,产酸多) 上下层均为黄色 产生H2S+铁盐 FeS 培养基成黑色 Double suger iron slant 4. 尿素培养基 组成:基础培基+尿素+酚红 底物 指示剂 原理: 有些细菌产生尿素酶 分解尿素 产氨 结果: 分解尿素 培基变红 不分解尿素 培基不变色 1 2 3 4 5 6 NS(ml) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 未知血清 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 (1:10) 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 菌液(摇匀) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 (4种,1种/人) 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 (阴性对照) 37℃水浴过夜 肥达试验 H凝集:絮状,以疏松大团沉于管底 O凝集:颗粒状,以坚实凝片沉于管底 凝集程度的判定以“+”、“-”号表示 ++++ 上清完全透明,细菌全部形成凝集块 +++ 细菌绝大多数凝集,液体有轻度混浊 ++ 50%细菌形成凝集,液体半澄清 + 仅少数细菌凝集,液体比较混浊 - 液体均匀混浊,无凝集(沉于管底,形成圆 形沉淀,边缘整齐) 以呈现++凝集的血清最高稀释度作为该血清的凝集效价
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