2010年山东省执业药师继续教育辅导材料-高效毛细管电泳法在药物分析.ppt

* 4）聚焦：具有不同等电点的生物试样在电场力的作用下迁移，分别到达满足其等电点pH的位置时，呈电中性，停止移动，形成窄溶质带而相互分离； 5）阳极端装稀磷酸溶液，阴极端装稀NaOH溶液； 6）加压将毛细管内分离后的溶液推出经过检测器检测； 7）电渗流在CIEF中不利，应消除或减小。 毛细管等电聚焦电泳已经成功用于测定蛋白质等电点，分离异构体等方面。 * 是将细粒径固定相填充到毛细管中，或在毛细管内壁涂覆固定相，以电渗流驱动操作缓冲溶液（流动相），使试样组分在两相间进行分离的电动色谱过程。此模式兼具电泳和液相色谱的模式。CEC可分为开管CEC（即管壁涂渍固定相）和填充CEC。 6、毛细管电色谱 capillary electroosmostic chromatography ，CEC * 二、高效毛细管电泳法在药物分析中的应用 高效毛细管技术在药物分析中的应用大致可以分为两部分： 一是原料药的定量、原料药中杂质的测定、药物制剂分析以及对它们稳定性的评价等以药品质量控制为目的的测定方法。 二是对进入人体内的药物或代谢物的吸收、分布、代谢、排泄等体内动态的研究，即临床药物分析。 * （一）HPCE在药品质量控制方面的研究应用 1．HPCE在中药分析中的应用 具有分离效率高、分析速度快、分析时间短、样品前处理简便、进样量少、有机溶剂消耗少、操作简便、分析成本低等优点。另外，HPCE在中药复方制剂复杂成分分析中还具有以下优越性：(1)毛细管柱易于全面清洗，可保持高柱效而使复杂成分较好分离；(2)分离模式多，适合于中药制剂中各类化学成分的分析；(3)不同电泳技术之间及HPCE与NMR、MS等多种技术联用可提高分析的精密度，更可拓宽其应用范围。 * 目前已有报道，采用HPCE对丸剂、胶囊剂、片剂、合剂、口服液、颗粒剂以及注射剂等中药制剂或中药中有效成分进行分析。例如，用胶束电动毛细管色谱（MECC）法测定牡丹皮、白芍、赤芍及其不同炮制品的牡丹酚、芍药甙的含量；选择毛细管区带电泳（CZE）分离模式，以麻黄素为内标，建立了适合莨菪类生物碱一阿托品、东莨菪碱、山莨菪碱、樟柳碱优化分离与颠茄酊剂及片剂定量分析的方法，可用于莨菪类生物碱中药制剂的质量控制等。 由此可见，HPCE在中药制剂质量控制及中药现代化进程中必将发挥巨大作用。 * 2．HPCE在天然产物分析中的应用 （1）蛋白质、DNA、多肽、氨基酸的分析： 主要包括肽、蛋白的鉴别、结构分析、微量制备以及蛋白的定量测定、纯度检测；测定氨基酸的组成、序列和一些物化常数（如分子量和等电点等）、鉴别结构和种类不同的蛋白质。在肽和蛋白质的鉴别分析中应用最多的是CZE。对扩散系数小的生物大分子而言，CE还可以作为收集非常纯的单一馏分的微量制备的手段。 例如分离多聚核苷酸并对产物进行纯度测定等，结果使人满意。 * 采用MEKC模式，在25分钟内分离了23种丹酰化氨基酸； HPCE可取代传统的氨基酸分析仪 实例1： * DNA排序 实例2： * （2）糖及其缀合物的分析 糖分析的难点是糖类物质一般为电中性，且亲水性强，多数没有吸光基团，检测上存在困难。 各种新的糖衍生化反应和检测技术的应用，使CE成为分析单糖、寡糖、糖肽、糖蛋白等糖类化合物的有效手段。单糖的解离常数值一般大于11，需选用pH11强碱性的缓冲液，直接进行电泳分离后紫外检测。这种方法也能用来测定简单寡糖。多糖一般利用酸解或酶解的方法将其转化为寡糖后进行分析。 * 在糖的检测方面，UV，EC和LIF（激光诱导荧光）是主要手段。例如：葡萄糖、果糖、绵子糖、木糖、半乳糖、阿拉伯糖、水苏糖等单糖可以利用CZE，胶束电动毛细管色谱（MECC）结合UV进行检测；寡糖和多糖主要采用CZE结合EC的方法进行检测；其他糖类（氨基糖等）则选择LIF（激光诱导荧光）检测。 * 3．HPCE在药物制剂分析中的应用 CE法具有能排除高含量复杂基体干扰、检测痕量成分的能力，且样品只需经简单预处理即可分析其有效成分含量，现已广泛应用于片剂、注射剂、糖浆、滴耳液、乳膏剂及复方制剂等各种剂型中主药成分的定量测定。 如有文献报道用低pH值的缓冲液测定糖浆中碱性主药的含量时，因赋形剂呈中性，将停留在进样端不迁移而在清洗时被冲走，故可将糖浆样品稀释后直接进样，无需前处理。 * 例如，采用此方法，经过筛选比较，确定缓冲液pH3.0，在HPCE柱上富集测定福莫特罗干糖浆；采用CZE技术测定5-HT受体拮抗剂奥丹西隆注射液的含量；用HPCE法在7分钟内同时测定盐酸洛美沙星、依