高中生物选修一___植物组织培养技术.ppt

一、植物组织培养的概念 1. 概 念 植物组织培养（Plant tissue culture）广义上是指无菌条件下，在特定的培养基上对离体的植物器官、组织、细胞和原生质体甚至包括完整植株进行培养的技术。 §1 实验室设置及仪器设备§2 实验基本操作§3 培养基的成分及其配制§4 培养条件的选择 §1 实验室设置及仪器设备 实验室是进行组培研究的主要场所，应能满足清洗、培养基制备、储藏、无菌操作、培养、鉴定等多方面的工作。 1．基本实验室 1.1 洗涤 根据工作量的大小决定其大小，一般面积控制在30-50m2。在实验室的一侧设置专用的洗涤水槽，用来清洗玻璃器皿。中央实验台还应配置2个水槽，用于清洗小型玻璃器皿。如果工作量大，可以购置一台洗瓶机。准备1-2个洗液缸，专门用于洗涤对洁净度要求很高的玻璃器皿。此外还应配置落水架、干燥箱、柜子、超声波清洗器等。地面应耐湿并排水良好。 配备的主要仪器设备有 ：天平、微波炉、pH计、药品柜、器械柜、电炉、各种规格的培养瓶、培养皿、移液管、烧杯、量筒、容量瓶、储藏瓶、冰箱等。冰箱用于储存培养基母液、激素维生素等贵重药品、彩色胶卷、及保存植物材料。天平应有不同感量。 配备高压灭菌锅、排风灭火设备等。   如果没有条件的话，可以将上述工作合并成一个准备间，要求是设备的安装和排列要合理、房间要明亮、透风，地面要便于清洁、防滑。 无菌操作室主要用于实验材料的接种操作，所以又叫接种室。通常由里外两间组成，外间是缓冲间，用于准备工作，还有防止污染的作用。缓冲间的门应该与接种室的门错开，两个门也不要同时开启，以保证无菌室不因开门和人的进出带进杂菌。缓冲间内应该设有水槽、实验台、鞋帽架、和柜子、紫外灯。无菌操作室的内壁应当用塑钢板或瓷砖装修，工作人员进入操作间前要穿上消过毒的工作服和拖鞋。 室内应配有超净工作台，紫外灯、解剖镜、各种接种器械等。 为了控制培养室的温度和光照时间及其强度，培养室的房间不要窗户，但应当留一个通气窗，并安上排气扇。室内温度由空调控制，光照由日光灯控制。一般要分两间，一为光照培养室，一为暗培养室。培养室外应有一预备间或走廊。 培养室应配有培养架、摇床、光照培养箱、生化培养箱、自动控时器等。日光灯一般用40W，固定在培养架的侧面或搁板的下面，每层有两支日光灯，距离在20cm，光照强度为2000-3000lx。 为试管苗提供满足生长的适宜环境条件。 （一）、灭菌工作是极其重要的。 首先应建立有菌和无菌的概念有菌的范畴：有菌：凡是暴露在空气中的物体，至少其表面都是有菌的。如植物的表面、超净工作台的台面，未处理的工具和手等。 无菌：高压高温处理（工具、器皿、培养基等）  物理或化学处理；  火烤后的物体；  健康的动植物不与内外部表面接触的组织  内部可能是无菌的（有时也有内生菌，但  不会影响培养，也不会污染） 1、物理方法：干热、湿热、过滤（0.25微米）、紫外灯、超声波等。 2、化学方法：使用灭菌剂或抗菌素，如酒精、次氯酸钠、升汞、漂白粉、高锰酸钾、双氧水、福尔马林等  适用于玻璃器皿和金属器械的灭菌。操作方法：150℃ 、40min或120℃ 、120min，如果发现芽孢杆菌，160℃ 、90～120min 适用于各种器皿、培养基、器皿、蒸馏水、棉塞、纸等。121℃ 维持20～30min注意点：加足水、排尽气、气压降到0时，才能开盖  培养基的灭菌一般用高压高温处理，但如果培养基中某些成分遇到高温分解（如某些生长调节剂GA3、玉米素等），就需要过滤灭菌。另外酶、血清等也需要过滤灭菌  灭菌方法：将生长调节剂或酶配成一定浓度，用注射器注入微孔滤膜虑，滤膜孔径0.22～0.45微米。制培养基时，现将培养基高压灭菌，待降至50℃左右时，加入适量的激素，然后分装。 主要是利用紫外灯进行照射，适合实验室空气、操作台等，灭菌时间20～30min。注意：关灯后5min后再进入。超净工作台关灯后要打开风机。 用火焰灼烧达到灭菌目的，适用于接种器皿的灭菌。 适用外植体、实验器皿、操作表面、皮肤等。几种常用消毒剂的效果比较 长期不用的培养室或接种室要进行熏蒸。方法：甲醛、高锰酸钾熏蒸。 甲醛的用量通常按每立方米空间2-6毫升计算，高锰酸钾的用量是甲醛的一半。室内准备妥当后，把称好的高锰酸钾放在瓷碗或烧杯内(最