毛细管电泳仪应用於中药成分之分析定量.docVIP

毛細管電泳儀應用於中藥成分之分析定量 行政院衛生署 藥物食品檢驗局 顧祐瑞博士 一 前言 　　中藥為我國重要的文化資產之一，原本就值得推廣與重視，近年來國內許多大企業投入大筆經費，致力於中藥新藥之研發。由於中藥材之成分複雜，且常因基原、產地、採收季節、炮製、儲存等種種因素，致使其成分有相當大的差異，進而影響中藥材的品質。因此，有關中藥成分之分析及品質之管制，變得相當的重要。 　　行政院衛生署為了提昇中藥濃縮製劑的品質，已於八十九年七月二十四日公告，自九十年一月一日起，凡申請葛根湯等十種中藥方劑之濃縮製劑，查驗登記新案及藥品許可證有效期間展延時，應制訂指標成分定量方法。美國藥物食品管理局(FDA) 亦於八十九年八月公佈，「Guidance for Industry (Draft) Botanical Drug Products」(美國FDA植物性藥物產品規範草案)，提出中草藥新藥研發，需以 CMC (即化學、製造、品質)加以管制。 　　目前中藥成分之分析定量，以高效液相層析 (HPLC)最普遍，然而HPLC分析時存在著若干變數及困難，例如通常分析時間長，且分析完成後管柱之清洗時間亦甚長；更換溶媒、管柱，清洗管柱需要時間，致使儀器自動化限制多；成分易殘留於管柱內，清洗不易，使用之緩衝溶液等添加劑，則易損害管柱內之填充物；管柱及溶劑費用高，尤其會產生大量含有有毒溶劑(如乙月青、二氯甲烷)之廢液。 　　毛細管電泳(Capillary electrophoresis或High performance capillary electrophoresis)，簡稱CE或HPCE，是最近十年來蓬勃發展的分析 　方法，電泳是電介質中帶電粒子在電場作用下，以不同速度向電荷相反的電極方向移動的現象，利用這種現象對某些化學成分進行分析的技術。 　　毛細管電泳的發展，在1967年Hjerten等率先提出在高電場，直徑3mm毛細管中作自由溶液的毛細管區帶電泳(Capillary zone electrophoresis)，簡稱為CZE；1984年Terabe等建立一種重要的分離模式，即以各組成分(特別是中性成分)，在毛細管內的膠束(Micelle)及緩衝溶液之間的分配為基礎之膠束電動力學毛細管層析 (Micellar electrokinetic capillary chromatography)，簡稱為MECC或MEKC；1990年Honda等最早將毛細管電泳應用於芍藥中 Paeoniflorin及Oxypaeoniflorin之定量，發現毛細管電泳之再現性佳，定量結果與HPLC相似。 　　毛細管電泳的種種方法中以上述CZE及MEKC最常用，其中CZE是毛細管電泳中最簡單的一種方法，毛細管內只充入緩衝溶液，分析之成分以不同的速率在分立的區帶內進行遷移，正、負離子化合物即可分離，而中性化合物在電場中則不會移動。MEKC是毛細管電泳中應用最廣的方法之一，既能分離中性成分，也能分離帶電成分，MEKC主要是在緩衝溶液中，加入一定濃度以上的界面活性劑，以形成膠束，其應用範圍包括維生素、大部分藥物及中藥成分。本文所舉之天麻及玄參兩個例子，皆為MEKC方法，且均以膽酸鈉作為界面活性劑，分析二種藥材中之不帶電荷高極性成分。 　　毛細管電泳之分析方法，係利用不同樣品離子電荷泳動速度的差異，配合毛細管內電解質在外加高電場下所產生的電滲流，形成各種樣品離子在毛細管中淨移動速度不同，因而達到分離效果。與傳統的平板電泳或高效液相層析比較，毛細管電泳的分離效率極高，理論板數常在105~10 7左右。另外，毛細管口徑小，散熱效果佳，因此可使用高電場進行電泳，大幅縮短樣品分離時間。 毛細管電泳與高效液相層析皆屬液相分離技術，兩者之分離機制不同，各有其應用的價值，惟就分離效率、分析速度、成本花費及樣品用量而言，毛細管電泳之理論板數較高，分析速度更快，幾乎不消耗溶劑，而樣品用量僅高效液相層析的數百分之一。毛細管電泳只要針對不同的分子性質(如分子大小、電荷數、疏水性等)改變操作模式和緩衝溶液的成分，便可分離不同的樣品。相較之下毛細管電泳具有更大的選擇性，欲分析不同的樣品亦不需更換價格昂貴的管柱。毛細管電泳與高效液相層析之比較整理如下： 毛細管電泳 高效液相層析 分析速度 較快 較慢 理論板數 較高 較低 溶媒消耗 無或少 多 樣品量 低(以nl計) 高(μl計) 管柱價格 低 高 管柱清洗 快、容易 費時 自動化 高 不容易 二毛細管電泳應用 (一)麻藥材中Parishin、Parishin B及Parishin C之含量測定： 　　天麻，原名赤箭，別名明天麻，係蘭科(Orchidaceae)植物天麻 Gastrodia elata 的乾燥根莖。Paris