对β-内酰胺类抗生素高分子聚合物质控现状的分析及相关问题思.doc

对β－内酰胺类抗生素高分子聚合物质控现状的分析及相关问题思考 CDE审评三部 张昕 成海平 ? 【摘要】本文综述了β－内酰胺类抗生素高分子聚合物测定的国内外研究进展，介绍了聚合物测定的原理和具体方法，分析了目前在聚合物测定中存在的问题，并针对问题提出了处理建议。 【关键词】高分子聚合物、质控现状、测定方法 1、概述 ??? 抗生素是临床用量最大和较易发生不良反应的药物。其中最常见的一类不良反应就是过敏反应。多年来的研究已证明，在β－内酰胺类抗生素所致的速发型过敏反应中，药物分子本身只是半抗原，药物中存在的高分子聚合物才是引发速发型过敏反应的真正过敏原，因此严格控制抗生素中高分子聚合物的含量有着重要的意义。 ??? 本文综述了高分子聚合物测定方法在国内外的研究进展，对实际测定过程中遇到的问题作简单的分析和探讨。 2、高分子聚合物的分类 ??? 抗生素中的高分子杂质系指药品中分子量大于药物本身的杂质总称，其分子量一般在1000～5000Da，个别可达10000Da左右。β－内酰胺类抗生素中的高分子杂质按其来源通常被分为两类：外源性杂质和内源性杂质。 ??? 外源性杂质包括蛋白、多肽、多糖等类杂质或抗生素和蛋白、多肽、多糖等的结合物，来源于发酵工艺，如青霉素中的青霉噻唑蛋白、青霉噻唑多肽等。 ??? 内源性杂质是指抗菌药物的自身聚合产物，聚合物既可来自生产过程，又可在储存中形成，甚至在用药时也可产生。对于现在的生产工艺，外源性的高分子杂质已经较少产生，对内源性聚合物的控制是当前抗生素高分子杂质质量控制的重点。 ??? 金少鸿等人的研究[1]表明，高分子聚合物不仅能引发IgE介导的过敏反应，而且青霉素类的抗生素还能经胃肠道吸收而引发过敏反应。故对β－内酰胺类抗生素中的高分子聚合物进行严格的控制，可以保证临床用药的安全有效。 3、高分子聚合物的质控现状分析 3.1? 对中国药典近年来收载品种的分析 ??? 为了对β-内酰胺类抗生素药物中的高分子聚合物进行有效控制，中国药典对收载的部分品种进行了聚合物质控，具体如下： ???? 表1、中国药典2005年版收载的测定高分子聚合物的相关品种 ????从表1可知，2005年版药典增订品种中除了头孢类外，以青霉素类的药物为主，这改变了2000年版药典中青霉素类药物无高分子聚合物检查的情况。从分子结构上来说，青霉素类的药物其实更容易发生聚合情况，因此，在2005年版药典中增加了对青霉素类药物的高分子聚合物质量控制。 3.2对国外药典收载品种的分析 ??? 美国药典23版曾收载了头孢他啶中高聚物的含量测定，检测方法为HPLC外标法，但由于高分子杂质具有高度不均一性和不确定性，无法制备出具有固定含量的对照品等原因，目前USP 24版已不再收载。英国药典中至今未有收载相关品种。 ????比较国内外药典，可以发现目前国外对于高分子聚合物的控制仍然没有明确的药典方法，这主要是由于高分子聚合物的对照品难以制备，中国药典收载的自身对照外标法定量测定β-内酰胺类抗生素中高聚物的检测方法，通过两种流动相的转换，以药品自身对照品取代高分子杂质对照品对β-内酰胺类抗生素中的高聚物进行检测，在一定程度上解决了国外无法解决的问题，在某种意义上填补了一项空白，为高分子聚合物的检测指出了一个新的方向。 4、高分子聚合物的测定原理、测定方法及问题讨论 ????关于高分子聚合物的测定方法，国内外已有许多报道，主要的方法是色谱法。其分离模式有三类：（1）反相模式；（2）离子交换模式；（3）凝胶色谱模式。由于结构不同的高分子杂质通常具有相似的生物学特性，故在药品质量控制中只需控制高分子杂质的总量，就能达到控制致敏物质的目的。因此，根据分子量差异进行分离的凝胶色谱模式是简便易行的分离模式。胡昌勤等人开发了一个以葡聚糖凝胶Sephadex G-10为基础的凝胶色谱分析方法[2]，可方便地用于对各种β－内酰胺类抗生素中高分子杂质的分离和分析。 4.1 凝胶色谱分析方法的原理?? ??? 在Sephadex G-10凝胶色谱系统中，由于Sephadex G-10的排阻分子量仅为700d，因此，除部分寡聚物外，β－内酰胺类抗生素中的高分子杂质在色谱过程中均不保留；即所有的高分子杂质表现为单一的色谱峰，其Kav＝0。在特定条件下，β－内酰胺类抗生素由于分子间的氢键、静电相互作用、疏水相互作用等次级相互作用，可以形成缔合物，导致其表观分子量增大；此时在Sephadex G-10凝胶色谱系统中和高分子杂质具有相似的色谱行为，即在Kav＝0处表现为单一的色谱峰。利用此原理，在Sephadex G-10凝胶色谱系统中，以药物自身为对照品，测定其在特定条件下缔合时的峰响应指标；再改变色谱条件，测定样品中的高分子杂质和