血清中肌酐的检测方法及其进展.pdfVIP

MedClin，October2009。V01．6，No．19 检验医学与临床2009年10月第6卷第19期Lab 血清中肌酐的检测方法及其进展 程海平综述，廖璞审校(重庆市第三人民医院检验科400014) 【关键词】血清}肌酐，碱性苦味酸肌酐反应；酶法 中图分类号：R446．1 文献标志码：A 文章编号：1672—9455(2009)19—1682—03 肌酐又称甲基胍基乙酸内酰胺，分子式为C4H70N3，是和水、氧的共同作用下生成醌亚胺(红色)，在505nm波长下测 8)，熔点255℃，具有 一种相对分子质量较小(Mr一113．118 定其吸光度A，其A值的大小和样品中肌酐的含量成正比的 水溶性(80．1g／L，16℃)的极性有机含氮化合物。肌酐在肌肉原理而设计的。肌氨酸氧化酶法灵敏度高，线性范围宽，试剂 中从磷酸肌酸通过自发和不可逆转化而形成。正常情况下，人 稳定性好。其主要干扰物为样品中肌酸，为去除肌酸的干扰， 体内肌酐含量基本稳定，一般维持在3～14mg／I，，肾脏机能受 可采用双试剂在试剂中去除肌酸的干扰。肌酐酶偶联肌氨酸 损时，肌酐的正常排泄受到阻碍，血清中肌酐含量增加，因此血 清肌酐含量是反映肾脏功能的重要指标[1“。肾病在我国乃至 生素C的干扰。此外，胆红素和血红蛋白也在一定程度上影 世界上的发病率居于前lO位，我国隐形肾病患者约占人口的 响测定结果，故对明显溶血或高胆红素血清样品应做自身空 25％，因此肌酐含量的测定对肾脏疾病诊断具有重要临床意 白。肌酐哑胺水解酶法用肌酐亚氨基水解酶水解肌酐产生N 义，以下是肌酐常用的一些检测方法。 一甲基乙内酰脲和NH3；再以谷氨酸脱氢酶催化a一酮戊二酸 1检测方法 1．1碱性苦味酸肌酐反应(Jaff6)Jaff6在1886年发现肌酐nm处吸光度降低速率求得肌酐含量。对多种可能的干扰物的 和苦味酸在碱性环境中反应时，可生成一种红色物质。Green—实验表明，胆红素、乳糜、抗坏血酸、溶血以及常用药物均不干 760 wald第1个系统地研究了Jaff6反应的化学过程，认为Jaff6反扰此方法，且其线性范围上限达1 p．mol／L。但该法的主要 应的红色产物是肌酐与苦味酸之阅生成1：1和1；2的络合缺点是试剂不够稳定，且肌酐酶不易得到，使碍试剂盒价格昂 物。一些肌酐的同系物或衍生物如胍基乙酸内酰胺，5一甲基胍 贵，在国内只有一些有实力的大医院在使用。综上所述，酶法 基乙酸内酰胺以及乙酰乙酸、丙酮酸、胆红素、乙内酰脲等物质 克服了Jaff6法特异性差的弱点，具有抗干扰能力强，没有试剂 均能和苦味酸发生反应，这些物质称为“假肌酐”，可导致肌酐 毒性，适合于自动分析等特点。但是，以上方法中很多内源或 测定结果偏高，大量的假肌酐存在于红细胞中，因此，肌酐的测 者外源物质对肌酐的测定产生干扰，或者试剂不稳定。后来人 定不宜采用全血。为了消除假肌酐的干扰，提高Jaff6反应的们研究利用毛细管电泳法和高效液相色谱(HPLC)方法测定 血清中的肌酐。 特异性，主要有以下几种方法：(1)Jaff6反应前对样品中的肌 1．3毛细管电泳法毛细管电泳是近10年来才进入实际应 酐进行纯化的方法主要是反应前利用白陶土、Fuller’s土或硅 酸铝土吸附肌酐，用吸附样品中的肌酐再进行Jaff6反应以提用的一种仪器分析方法，分离效率高，分析速度快，样品用量 高反应的特异性；(2)根据肌酐一苦味酸络合物与假肌酐一苦 少，自动化程度高。该方法应用于肌酐测定已有报道：Tran 味酸络合物色泽稳定性差异，通过酸化过程利用“二次读数法” 等[3]采用加入阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)作为 来计算“真肌酐”的浓度；(3)我国临床实验室常用的方法是根 增溶剂和硼酸缓冲体系的毛细管胶束电动色谱(MEKC)方法。 据苦味酸与肌酐反应速率与其干扰物的速率不同，利用“速率 张燕玲等[4]采用毛细管胶束电动色谱法，用国产TH一2000毛 法”测血清中的肌酐浓度。此