微小RNA及其表达水平检测方法的研究进展.pdfVIP

丝墅垄堂!塑生堡旦箜!!鲞笠堡塑垡型!翌丛!i堕塑!垒逝!型塑!型丝：坠堡： 文章编号：1673-8640(2009)04-0316-05中图分类号：Q503 文献标识码：A 微小RNA及其表达水平检测方法的研究进展 李 莉1 综述， 温旺荣1， 朱晴晖2 审校 关键词：微小RNA；茎环弓i物；逆转录；聚合酶链反应 自1993年第一种微小RNA(microRNA，miRNA通过翻译的抑制或mRNA的降解诱导目 miRNA)…被发现以来，迄今为止，已被发现的的基冈的沉默，这种机制在各物种间非常普遍，并 miRNA超过l000种。现阶段对miRNA的研究且具有时间、空间的特异性。由此可见，miRNA 主要集中于其在机体中时间、空间的表达规律及 对机体的正常生长、发育具有调节作用。 其与机体某些疾病，特别是‘-jjloe瘤或病毒感染之 3．miRNA和siRNA近年来备受关注的 间的关系。随着对这一领域研究的不断深入， RNA干扰(RNA miRNA与疾病之间的相互关系将更趋于明朗化， 同源性的双链RNA诱导基因转录后沉默的一种 最终使其更好地应用于疾病的诊断、治疗及预后 方式。体内积累的双链RNA被Dicer酶切割成 判断等，而这一切都有赖于建立理想的检测方法。 miRNA的检测方法近年发展很快，已从定性发展 段与体内的酶结合形成RISC，后者可特异性地与 到定量，现就其主要特征、在医学上的研究和应 内源mRNA的同源区结合，通过核酸内切酶argo— 用，尤其是检测miRNA表达水平的方法作一概 naute的作用使mRNA降解，从而导致基因沉默； 述。 siRNA也可以根据所需”沉默”的靶基因人工合 一、miRNA的主要特征 成，是基因治疗的T具之一。而miRNA是内源性 22nt左右的单链RNA，亦为Dicer酶加工的产物， 1．定义miRNA由一大类约22nt的非编码 小RNA组成，其广泛地存在于从低等的病毒、线 广泛存在于真核生物中，miRNA可抑制靶基因的 虫、植物到高等的动物机体中。作为内源性的翻 翻译，也可以导致靶基因的降解，即在转录后水平 译抑制因子，miRNA通过与靶mRNA的3’．非翻和翻泽水平上负调控靶基因的表达，主要在发育 译区(untranslated 过程中起作用。 region，UTR)的碱基互补配对 而起作用。当其与mRNA不完全互补配对时，会 二、miRNA在医学卜的研究和应用 抑制翻译的过程；而与mRNA完全互补配对时， miRNA通过诱导特定目标基因的沉默，参与 则切割或降解mRNA悼J。 了机体一系列重要的生理过程，如调控生物的生 2．来源与作用机制 miRNA来源于一个初 长发育、细胞分化、形态变化及细胞凋亡等。某些 miRNA能够开启或者关闭决定正常细胞增殖或 始转录产物primary—miRNA(pri—miRNA)，具有1 个或多个茎环结构，由RNA聚合酶Ⅱ协助转录而 分化的基因开关，当这些过程改变时会导致细胞 来。Pri—miRNA在RNA酶Ⅲ一Drosha和Pasha／增殖的失调，从而导致肿瘤的形成。近年来，miR— NA与肿瘤的关系已成为牛命科学的研究热点， DGCR8的切割下产生1个60～l10nt的miRNA 其与多种恶性胂瘤，如肺癌、乳腺癌等之间的关系 的前体precursor-miRNA(pre—miRNA)。pre—miR— NA通过输出因子exportin-5转至胞浆，在RNA酶被相继报道¨订J。 In—Di