自制纤维素金属螯合亲和膜的部分吸附性能及纯化牛血SOD.doc

自制纤维素金属螯合亲和膜部分吸附性能及纯化牛血SOD膜Cu2+吸附量稳定维持在15.0μmolcm2)-1左右 U·mg-1，纯度为81%；吸附-洗脱方式（动态法）分离纯化SOD，穿柱流出样品比活达12400 U·mg-1，纯度为85%。结论 自制的纤维素亲和膜有较好的吸附性能和纯化效果，重复使用性能良好，制备和纯化过程简便易行。 关键词：亲和膜；金属螯合；纤维素；SOD Partial Adsorption Characteristics of Self-made Cellulose Metal-Chelated Affinity Membrane and Its Application for Purification of Bovine SOD from Blood LIU Jian-rong1, ZHANG Hao2, Gu Ya-jun1, ZHAO Xiao-yu1 (1. Research Center of Bioengineering, Hebei University, Baoding 071002 , China; 2. Henan?Shuanghui?Investment?＆?Development?C.,L15μmol·(cm2)-1 repeatedly. The adsorption capacity of Cu2+ affinity membrane for ovalbumin dissolved in 0.9% NaCl was higher than that dissolved in deionized water, but as for protein recovery, the former was lower than the latter. The sample with specific activity of 8770 U?mg-1, purity of 81% was desorbed by static adsorption-desorption. The liquid that passed through column by dynamic adsorption-elution was specific activity of 12400 U?mg-1 and purity of 85%. CONCLUSION Self-made cellulose metal-chelated affinity membrane has a rather good absorbing characteristics and purifying effect, adapt well to repeated use, the preparation and purifying process is easy and convenient. KEY WORDS: affinity membrane; metal chelating; cellulose; superoxide dismutase (SOD) 固定化金属螯合亲和色谱(Immobilized metal ion affinity chromatography，简称IMAC)是Porath等[1]在上世纪 70年代提出一种新的蛋白质分离纯化方法，支撑材料为琼脂糖凝胶。但凝胶颗粒易压缩变形，机械强度差，蛋白质在凝胶颗粒间扩散传质慢，分离操作只能在低流速下进行，从而使其在大规模蛋白质分离纯化中的应用受到限制。使用微孔膜作支撑材料始于80年代[2]。近年来,人们结合亲和色谱特异性高和膜分离速度快、成本低、处理量大等优点,提出以膜(如纤维素滤纸)作为亲和配基载体制备金属螯合亲和膜用于蛋白质和其他生化制剂的毒素去除和分离纯化，并取得了良好的效果[3-5]。超氧化物歧化酶superoxide dismutase，SOD)广泛存在于生物界是生物体防御氧化损伤的一种十分重要的酶其中Cu,Zn-SOD已广泛应用于医药、食品和化妆品等领域[6]本实验自制纤维素金属螯合亲和膜金属离子和蛋白吸附性能研究，并对牛血SOD进行纯化。1 材料与方法 1.1 SDS（进口分装），纤维素滤纸（中国杭州新华造纸厂），以下其他试剂均为国产分析纯：抗坏血酸（维生素C），邻苯三酚，二甲亚砜（DMSO），环氧氯丙烷（EPI），亚氨基二乙酸（IDA），EDTA，Na2CO3，NaOH，Tris，NH4Cl，CuSO4NiSO4和FeCl3等。WFJ 2100 型可见分光光度计尤尼克上海仪器有限公司WD-9413B凝胶成像分析系统（蛋白含量分析软件gel-pro 32北京六一仪器厂）-2型恒温振荡器厂HD-2000型核酸蛋白检测仪上海嘉鹏科技有限公司DYCZ-24D