【环境毒理学】环境毒理学的基本研究方法.docVIP

第三章 环境毒理学的基本研究方法 实验动物的选择： 物种选择： 选择对外液化学物的毒性反应及代谢特点与人类接近的物种； 选择自然寿命不太长的物种； 选择易于饲养和实验操作的物种； 选择经济并易于获得的物种。 品系选择： 近交系动物 采用连续20代以上兄妹交配或亲子交配而培育的纯品系动物。如津白、津白、615， BALB／C， C3H、C57B／6J小鼠等。 突变系动物 动物在生长繁殖过程中，通过自然突变或人工定向突变的办法，使其某基因发生突变，并丧失了原有的正常功能。这种突变的基因可以世代相传并保持遗传基因特性的品系动物。 杂交群动物 两个不同近交系之间有目的进行交配，所产生的第一代动物， 亦称杂交一代动物。 封闭群动物 一个动物种群，在5年以上不从外部引进新血缘，仅由同一品系的动物在固定场所保存繁殖的动物群如昆明种小鼠、NIH小鼠、LACA小鼠、Wistar大鼠SD大鼠、青紫蓝兔、新西兰兔等。 微生物控制的选择： 无菌动物 体内外均无任何微生物和寄生虫的动物 无特定病原体动物（SPF）体内无特定的微生物和寄生虫存在的动物。实际上是无传染病的动物，容许携带非特定微生物。饲养于封闭的系统中。 清洁动物 有程最低限度疾病动物，动物体内外不携带人畜共患的病原体或动物传染病病原体，与SPF动物不同的是，抗体检查常有脑脊髓炎病毒、鼠肝炎病毒等抗体滴度，但不应有临床症状、病理改变及自然死亡。饲养在半屏蔽系统 第一节 急性毒性试验 一、急性毒性试验的目的： 概念：研究化学物大剂量一次染毒或24小时内多次染毒动物后所引起的毒作用试验。 主要根据人体可能的暴露途径，选择经口、经皮、经呼吸道的染毒途径进行急性毒性试验，获得 LD50或LC50。农药等有可能与皮肤或眼接触的化学物需进行皮肤刺激试验、眼刺激试验和皮肤变态反应试验。对呼吸道有刺激作用的化学物还应进行吸入刺激阈浓度试验。通过急性毒性试验，可对化学物的毒性作出初步的估计并确定其急性毒作用特征，为急性毒性定级、进一步试验的剂量设计和毒性判定指标的选择提供依据。 目的：在短期内了解该物质的毒性大小和特点，并为进一步开展其他毒性试验提供设计依据。 1、确定供试化学物急性毒性的剂量—反应关系和中毒特征； 2、求LD50或LE50,为急性毒性评价提供依据。 3、研究毒物的毒动学和毒效学过程。 用来表示急性毒性大小的是LD50:对受试物的个体感受性影响较小，有更高的重现性；从剂量反应曲线上看它处于曲线的中段，是死亡率对剂量敏感的部位，有60％一70％死亡动物集中在LD50附近。 见p505表22-5，22-6 二、试验程序与评价 1．动物选择 首先选择受试物在体内代谢情况与人体内相近的或对受试物最敏感的品系。 啮齿类：大鼠、小鼠； 兔、猪、狗。 应对两种性别、成年和幼年动物进行测定。 2．染毒途径与方式： 一般应与人的接触途径相同。常用的有以下几种： (1)经口染毒 常用灌胃法，也可将受试物放在饮水中由动物自由摄取。将化学物与饲料混和．具有剂量不准确的缺点，而且常会影响吸收，降低化学物的毒性。 为了便于染毒常需用溶剂来溶解受试物或将其配成混悬液，溶剂本身应无毒，且不与受试物起反应。溜胃容积一般大鼠不超过3m1，小鼠不超过o．5m1，当染毒剂量过大时，可分几次给药。 (2)经呼吸道染毒 将实验动物放在有毒气或粉尘的染毒柜内进行染毒。急性吸入染毒采用静式染毒瓶(20—25L)或染毒拒(25—50L)，加入定量受试物形成所需浓度的空气环境，让动物自由吸入，染毒2—4h。 (3)经皮肤染毒 本法主要用于化学物如化妆品农药经皮(或粘膜)吸收所引起的急性毒性。常用动物是成年家免或脉鼠，有时也用大鼠和小鼠。在正式给药前24h，给动物背部脱毛，注意勿伤皮肤。将受试物均匀涂布于皮肤表面，用纱布覆盖，共敷24h。 3．试验程序： （1）剂量与分组 首先应根据受试物的结构对比文献中类似化学物的致死量作初步估计，然后进行预试以找出粗略的LD50或LD0。正式试验可在LD100与LD0之间设5—7个剂量组。 （2）症状观察 时间：24h或两周内的反应。 观察内容：表现症状和解剖观察p504表22-4 三、 LD50的计算与结果评价 计算LD50及其标准误的方法：. 通常采用概率单位法和寇氏法。见p506。 根据所得结果，按前述急性毒性分级标准，评定其毒性大小。LD50值愈小，毒性愈大。各种化学物之间的毒性有明显的差异。 概率单位法 用正态曲线下的面积来表示死亡率的大小，其均数左右边的面积各为50%。将正态曲线横轴上的单位，用标准正态差为单位来计算：d=(x-μ)/δ 为消去负号，将其值一律加5，称为概率单位。 死亡率