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第三章 灭菌技术 【本章学习的目的和要求】 1.了解培养基灭菌的原理；了解发酵培养液的无菌检查方法；了解空气除菌的原理。 2.熟悉空气过滤除菌的流程和常见设备无菌。 3.掌握常用的灭菌方法和原理；掌握培养基分批灭菌和连续灭菌的操作流程；掌握发酵用空气的质量标准。 第一节 灭菌 灭菌是指用物理的或化学的方法杀灭或除掉物料及设备中一切有生命的有机体的技术或工艺过程。 一、常用灭菌方法的基本原理 （一）化学物质（药剂）灭菌 化学药剂适用于生产车间环境的灭菌，接种操作前小型器具的灭菌等。 常用的化学药剂介绍如下： 1．乙醇 70%-75%乙醇溶液杀菌作用最强 2．甲醛 将甲醛溶液（37%）直接加热，按18ml/m3计算用量 3．新洁而灭 0.25%的溶液 4．石炭酸3%-5%的水溶液 (二)辐射灭菌 紫外线波长在240-300nm范围内 （三）干热灭菌 一般要求160-170℃，保温1-2h (四)湿热灭菌 一般的湿热灭菌条件为121℃，30min（五）过滤除菌 二、培养基的灭菌 目前在工业生产中培养基的灭菌通常采用湿热灭菌法，包括实罐灭菌（实消）、连续灭菌（连消）两种方法 （一）微生物的死亡速率与理论灭菌时间 1．微生物的热阻 致死温度:杀死微生物的极限温度。 致死时间:在致死温度下，杀死全部微生物所需要的时间。 在致死温度以上，温度越高，致死时间越短。 * * 。 过夜 121 180 140 150 150 120 160 60 170 灭菌时间（min） 灭菌温度（℃） 表4-1 干热灭菌所需温度和时间 1 0.01 150 2 0.08 140 8 0.5 130 27 4 120 50 15 115 67 30 110 99.3 400 100 培养基营养成分破坏量（%） 灭菌时间(min) 灭菌温度（℃） 表4-2 不同灭菌条件下对培养基营养成分破坏的情况