第2章 仪器的日常维护.doc

第2章 FACSCalibur日常操作和维护 2.1 细胞仪各部构造 流式细胞仪可区分为两大部份，仪器本体，及Macintosh计算机。仪器上几个重要部份的位置及功能在此先做介绍： 电源：在仪器右侧下方，操作时要先启动仪器本体再打开计算机及打印机。 仪器面板：在仪器前方面板的右下方有 3 个流速控制键（LO/MED /HI）及3个功能控制键（RUN/STANDBY/ PRIME），任何时间均各只有一个按键有功能。 流速控制： LO： 样品流速：12 (l /min MED： 样品流速：35 (l /min HI： 样品流速：60 (l /min 功能控制： RUN： 绿色时表示样品开始输注。（黄色时表示仪器不正常，请检查是否漏气） STANDBY： 无样品或暖机时的正常位置，此时鞘液停止流动，激光功率会自动降低以延长雷射寿命。 PRIME： 自动冲洗进样针并将鞘液充满流动室，使用时机有：装机开机、更换鞘液、清洗仪器或清洗进样针等。 鞘液筒与废液筒：鞘液筒和废液筒在主机正面左下方的储液箱。 样品输注区：见右图。 计算机与打印机：打印机是单独的控制电源。 2.2、FACSCalibur 开机程序 FACSCalibur 的设计将仪器的维护工作减至最少，但是，为了保证仪器的正常运转和测定结果的可靠，仪器开机前后仍需要进行一些必要的常规维护。 开机标准程序： 开启细胞仪电源。 开启其它周边配备电源，如打印机。 开启计算机。 确认鞘液筒有八分满，确实旋紧。 将废液倒掉，并在废液筒中加入100ml 消毒液。 将气压阀方向调在加压（Pressurize）位置。 排除液流过滤气中的气泡。 使用1ml 鞘液为样品，执行 PRIME 功能两次。 HIGH RUN 两分钟，即可开始分析样品。 样品上机前的再确认事项： 是否已将检品浓度调至1X106 cells/ml？一般实验只需1 ml的检品。 是否已去除检品中的细胞团块，以防止管路堵塞？ 是否上样管有裂痕？ 是否已将专用鞘液筒充填至八分满？ 是否已将废液倒掉，并在废液筒中加入100 ml消毒液？ 是否已将液流过滤器中的气泡排空？ 是否已将所有管线及管路装置妥善？并将气压阀方向调至正确定位？ 请填写使用登记表。 2.3 FACS Calibur 关机程序 实验结束后，请于关机前清洁加样针的外管和内管，防止加样针堵塞或有染料残留。 2.3.1 执行「日常除污」与「清洗」时机： 如在使用了一些特殊荧光染剂（如PI、AO、TO等）后，需执行「日常除污」与「日常清洗」。 全血样品如进行Lyse/No Wash分析，需执行「日常除污」与「日常清洗」。 某些样本中含有大量蛋白成分，这些蛋白成分在上样针中会残留，积聚过多，会影响实验检测。需执行「日常除污」与「日常清洗」。 一般细胞株、或全血样品进行Lyse /Wash分析，只需执行「日常清洗」。 2.3.2 [日常除污」程序 将样品支持架置于旁位。 取 2 ml消毒液上样品，让仪器的真空系统抽取约1ml的液体。 将样品支持架回正，按 HI RUN，然后让消毒液清洗管路5分钟。 取 2ml dH2O 上样品，重复上述步骤1-3。 2.3.3 [日常清洗」程序 应用时机：关机前必要动作。 将样品支持架置于旁位。 取 2 ml消毒液上样品，让仪器的真空系统抽取约1ml的液体。 将样品支持架回正，按 HI RUN，然后让消毒液清洗管路5分钟。 取 2ml dH2O 上样品，重复上述步骤1-3。 注意最后只留约 1 c.c. dH2O 在试管中。 2.3.4 FACS Calibur 关机 按Standby 以冷却激光，Standby五分钟后关闭细胞仪。（务必等五分钟后再关 FACSCalibur 电源，以延长激光光源寿命。） 倒掉废液，并回填 100 ml消毒液。 将气压阀放在「漏气」位置。将鞘流液筒充填至八分满。 确认退出计算机中所有BD应用软件，所有数据数据已储存备份。关程序。 关闭苹果计算机。 2.3.5 清洗液的选择 FACS Clean 清洗液：流式细胞仪的常规清洗用液，直接使用，可有效去除仪器管路内的样本、染料等造成的污染。 漂白水—NaClO溶液：流式细胞仪的常规清洗用液。目前市场上的漂白水有效氯浓度多为5-10%。0.45mm滤膜过滤后备用。 FACS Rinse 清洗液：流式细胞仪的清洗液，直接使用，可有效去除仪器管路内积聚的蛋白成分。 表面活性剂—Triton：使用浓度为0.1%，0.45mm滤膜过滤后备用。使用表面活性剂时，注意上样管中不要加满，也不要反冲，防止操作不当造成液体进入气路，或进入压力控制器。 蒸馏水：为了防止管路内残留有清洗液，形成结晶或造成管路接口的腐蚀，在使用清洗液清洗完