药学：革兰氏染.pptVIP

实验内容 一、细菌染色标本观察 （操作） （革兰染色法） 【菌种】齿垢 【试剂】生理盐水、革兰染液 【其他材料】酒精灯、接种环、玻片、牙签、吸水纸、 显微镜等 【方法】1、细菌涂片标本的制片 2、革兰染液染色 3、油镜下观察结果 一、革兰染色法 由丹麦医生Hans Christian Gram于1884年创立。 器具：接种环（上）和接种针（下） 柄约22cm 2—5mm 绝缘柄 约7.5cm 金属柄约14.5cm 5—8cm 安装环(针)的螺口(约8mm) 细菌涂片的制备 操作原则：无菌操作（烧灼灭菌） Aseptic area 10-20cm 外焰 焰芯 内焰 菌液采取法 细菌涂片的制备 细菌涂片的制备 一般制备涂片包括涂片、干燥、固定三步。 涂片 干燥 固定 【操作步骤】 固定的目的： 使细菌的细胞凝固，使菌体与玻片粘得更牢固； 可改变菌体对染料的通透性； 加热固定可杀死细菌，比较安全。 结晶紫 1’ 碘液 1’ 95% 乙醇 30” 复红 1’ 冲洗 滤纸干燥 油镜观察 冲洗 冲洗 冲洗 二、革兰染液染色 初染 媒染 脱色 复染 【操作步骤】 紫色（G＋） 革兰氏染色步骤示意图 革兰氏染色 甲菌 乙 菌 初染 结晶紫 媒染 碘液 脱色 乙醇 复染 稀释复红 紫色（G＋） 红色（G-） 革兰氏染色步骤示意图 【结果】 细菌被染成紫色者，称为革兰阳性菌； 而细菌染成红色者，称为革兰阴性菌； 阳性菌——紫色 阴性菌——红色 【革兰氏染色法的原理 】 1、细胞壁通透性学说 2、等电点学说 3、化学学说 通透性学说 G+菌细胞壁结构致密，肽聚糖层厚，脂质含量少，乙醇不易进入。 G-菌细胞壁结构疏松，肽聚糖层薄，含大量脂质，乙醇易渗入。 等电点学说 G+菌等电点（pI2~3） G-菌等电点（pI4~5） 在相同pH条件下G+菌所带负电荷比G-菌多，所以与带正电荷的结晶紫染料结合较牢固，不易脱色。 化学学说 G+菌菌体内含有大量核糖核酸镁盐，可与碘、结晶紫等染料牢固结合，使已着色的细菌不易被乙醇脱色 G-菌 菌体内含核糖核酸镁盐很少，故易被脱色 注 意 事 项 涂片的厚度。 固定的程度。 染色的时间控制：一一半一。 冲洗的方法，不要对着涂片区。 95% 乙醇脱色时间。 实验报告（作业） 简要写出革兰氏染色原理、操作步骤 绘制革兰染色镜下细菌图