娃娃鱼繁殖与人工养殖核心技术---培养藻类,维护藻相稳定。.doc

娃娃鱼繁殖与人工养殖核心技术 -----培养硅藻、维护藻相稳定、也是不二法门 金立成 藻—是活藻实验：本实验发现，五种 N. oculata、I. galbana、C. muelleri、T. chui、S. costatum 皆能达到降低生长，其中以 T. chui抑制生长效果最为明显，即浓度 10 cell/ml 环境中在24 小时已完全抑制 生长。但是随着 T. chui 浓度的增加，反而无法达到完全抑制生长的效果，而在浓度10 cell/ml环境中发现，24小时后的菌量有上升之趋势，因此推断三种浓度在相同体积下，由于低浓度10 cell/ml培养出来年轻的藻体细胞较10cell/ml、10 cell/ml 为多，以致于其活性最佳，进而与病原菌 在 同 一 水 体 中 相 互 竞 争 下 短 时 间 内可达到抑制V.alginolyticus 的生长；添加 I. galbana 的抑菌实验中，可发现在三种浓度下皆可达到完全抑制生长之效果，其中以浓度10 cell/ml 培养环境中较佳，72小时可达到完全抑制生长；添加 C. muelleri 的抑菌实验中，可发现在三种浓度下皆可降低 生长之效果，并且三种浓度皆在 72 小时可达到完全抑制 生长之效果；添加 S. costatum 抑菌实验中，可发现在三种浓度下皆可降低 生长之效果，且浓度10cell/ml 环境下在 72 小时即可达到完全抑制 生长之效果；添加 N. oculata 抑菌实验中，可发现三种浓度皆可降低 V.alginolyticus 生长，其中以浓度 10 cell/ml N. oculata 环境下的效果最佳，在 72 小时达到完全抑制 生长。Nieman (1954)和 Galbraith and Miller (1973a,b,c)指出，微藻的抑菌活性取决于脂肪酸碳链的长短，当脂肪酸连接10个以上的碳原子，会使细菌的活性降低，而在后期的研究报告亦证实了微藻的抗菌活性取决于脂肪酸链的长短 (Duff et al., 1966 ； Aubert et al.,1968a,b；Aubert and Gambarotta, 1972；Berland et al., 1972；Aubert etal., 1979；Gauthier, 1980；Cooper et al., 1983；Findlay and Patil, 1984；Pesando, 1985；Visco et al., 1987；Kellam et al., 1988)，另外苏 (1999)指出五种 N. oculata、I. galbana、C. muelleri、T. chui、S.costatum 皆富含高度不饱和脂肪酸(DHA 及 EPA)，故推论本实验结果中的五种皆会抑制 生长的原因，可能是其所含有的不饱和脂肪酸皆为碳原子 10 以上，所以有抑制 V.alginolyticus 生长的效果。Kogure et al. (1979)指出，利用不同的光度培养 S.costatum (700、3000、9000 Lux)对于病原菌抑制的效果，其中以3000Lux 抑制效果最佳，另外赵等 (2002)指出此五种的最适培养光照为3000～4000 Lux，这其中意味着当在最适光照环境下，其生长速率较快，对于病原菌的抑制效果也最好。另外，研究报告也指出在指数生长期间可有效的抑制病原性弧菌的生长(Waksman et al., 1938；Droop and Elson, 1966；Sieburth., 1968；Bell and Mitchell, 1972；Simidu et al., 1977)。而本实验所设置 5 种的培养光照范围为2500~3500 Lux，并且实验初期所接种的微藻皆为指数期的藻种，而在此条件下所培养的对于病原性弧菌的抑制皆有良好的效果，推测可能是因为此光照适合五种在指数期的生长，而其生长速率上升会与病原性弧菌竞争营养盐及生长空间，进而达到抑制弧菌的效果。另外在本实验当中亦发现，将五种震碎后，其细胞内产物亦有抑制病原性弧菌的效果，而本实验在活体抑制试验当中，所使用的微藻为指数期的活藻，但其中还是会有些许的的藻类会提早老化死亡，这些藻类死亡后所释放出来的胞内产物，可能对于病原性弧菌有抑制的效果，但有待进一步的实验来探讨其抑制的机制。比较五种 S. costatum、C. muelleri、I. galbana、T. chui、N. oculata 对于病原性弧菌 的抑制效果中发现，S.costatum 及 N. oculata 对 生长抑制效果不如 T. chui、I. galbana、C.