液相常见问题解疑.doc

问:用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？ 关于漂移问题：1． 温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定2． 流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等3． 柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡 关于快速变化问题1． 流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定2． 泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。3．流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合问: 色质联用中毛细柱的选择应注意什么问题？1． 柱效要高2． 热稳定性好3． 化学惰性强具体选择应注意1． 柱极性。根据分析样品选择不同极性的柱子进行分析2． 柱子内径。内径大小决定柱容量3．液膜厚度。分析样品温度不一样，对膜厚有不同要求，温度高液膜要厚，温度低液膜要薄4．柱长度。柱越长，柱效越高，分离效果越好，但也存在吸附问题，柱子过长，分析时间长，因此要根据样品考虑柱子长度5． 外涂层（柱体）的选择。6． 另外还有仪器型号、分析对象等因素问:液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？1．筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。2．存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子问：从那些方面可以简单判别毛细管柱子的热稳定性好坏？1．分配容量（或容量因子）K，好的柱子在高温运行后，分配容量K不应有明显的下降，否则，说明柱子的热稳定性不好2．理论塔板数n，热稳定性好的柱子经受高温后，理论塔板数应基本保持恒定3．柱子的极性。热稳定性好的柱子，高温前后极性变化不大，具体表现为保留指数I值没有大的变化。4． 噪声。热稳定性好的柱子在高温下使用后，噪声不能增加。5．柱子的去活层，毛细管柱子涂固定液前内部一般要用去活性试剂去活以增加惰性。质量好的毛细管柱子高温后，去活层不应该变化，表现在对强极性样品或酸碱性样品的吸附性不能增加。问：为什么进样器内的玻璃衬套会对色谱行为造成影响？进样器内的玻璃衬套主要有下列作用：1． 提供一个温度均匀的汽化室，防止局部过热。2． 玻璃的惰性不不锈钢好，减少了在汽化期间样品分解的可能性。3．易于拆换清洗，以保持清洁的汽化室表面，一些痕量非挥发性组分会逐渐积累残存于汽化室，高温下会慢慢分解，使基流增加，噪声增大，通过清洗玻璃衬套可以消除这种影响。4．可根据需要选择管壁厚度及内径适宜的玻璃衬套，以改变汽化室的体积，而不用更换整个进样加热块。从以上几个方面可以知道玻璃衬套对色谱行为造成影响的原因。问：毛细管色谱分流进样时，非线性分流的主要原因是什么？ 1． 进样器温度太低，样品汽化不完全，发生分级分流。2．进样器温度太高，某些组分可能发生热分解，也有的样品可能发生催化分解，或样品部分地被吸附在进样器内表面上。3． 在分流点以前样品没有混合均匀或混合不充分。4． 系统的进样垫、柱接头等地方漏气。问：HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法1． 样品量不足，解决办法为增加样品量2． 样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子3． 样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器4． 检测器衰减太多。调整衰减即可。5． 检测器时间常数太大。解决办法为降低时间参数6． 检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗。7． 检测池中有气泡。解决办法为排气。8． 记录仪测压范围不当。调整电压范围即可。9． 流动相流量不合适。调整流速即可。10．检测器与记录仪超出校正曲线。解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。问：做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在？如何解决？ 原因可能有：1．泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理；2． 比例阀失效，更换比例阀即可；3． 泵密封垫损坏，更换密封垫即可；4．溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，必要时改变脱气方法；5． 系统检漏，找出漏点，密封即可；6． 梯度洗脱，这时压力波动是正常的。问：做PGS/MS分析时，如何防止焦油状污染物进入毛细柱？ 聚合物，尤其是一些含氮，硫及卤素的高分子裂解时，常有焦油状物质产生。为防止这种焦油状物质进入毛细柱造成污染而使柱性能下降，可采用保护预柱，即在裂解器与毛细柱之间接一填充预柱，通过控制预柱温度而使焦油状物质滞留在预柱内，预柱可置于GC气化室内，这样既容易控制温度，又减少系统的死体积，当然，预柱填料需经常更换。问：我最近更换了另一种牌号的ODS柱，虽然分离情况仍可以，但保留时间不能重现，为什么？ 这是因为被分析物可能具有形成氢键的能力。尽管过去几年来，填料的制造技术有了极大的提高，但不同的厂商的ODS填料表面硅醇基的浓