FQ-PCR同步检测HCV以及HBV方法的建立及应用.doc

  FQ-PCR 同步检测 HCV 以及 HBV 方法的 建立及应用# 周康平1，柳小英1，李卫2，王业富1** 5 10 15 20 25 30 （1. 武汉大学生命科学学院，武汉 430072； 2. 湖北省产品质量监督检验研究院，武汉 430061） 摘要：根据 HBV Pre-S 基因和 HCV 5 UTR 的保守序列设计引物及 TaqMan-LNA 探针，构 建重组质粒作为荧光定量 PCR 的标准品。优化荧光定量 PCR 反应条件和反应，建立了可同 时检测 HBV 和 HCV 的双重荧光定量 PCR（FQ-PCR）方法，并对所建体系进行方法学评价。 结果显示该方法对 HBV 及 HCV 的线性范围分别为 107-102 copy/μL 和 107-102 copy/μL，相 关系数都为 0.999。对阳性标本检测均呈阳性，对非目标菌检测均呈阴性。应用该方法对 175 例临床标本进行考核，有 HBV 阳性 16 例，HCV 阳性 8 例，其中 HBV 和 HCV 双阳性 2 例。 本研究建立的双重 FQ-PCR 方法特异、快速、灵敏，对 HBV、HCV 的血液筛查有重要意义。 关键词：医学微生物学；乙型肝炎病毒；丙型肝炎病毒；锁核酸；荧光定量 PCR 中图分类号：Q939.93 The establishment and application of the method of FQ-PCR, simultaneous detection of HCV and HBV Zhou Kangping1, Liu Xiaoying1, Li Wei2, Wang Yefu1 (1. Wuhan University School of Life Sciences, WuHan 430072; 2. Hubei Province Product Quality Supervision and Inspection Institute, WuHan 430061) Abstract: Based on HBV Pre-S gene and the HCV 5 UTR of the conserved sequence, we design primers and TaqMan-LNAs probe, and construct the recombinant plasmid as a standard for quantitative PCR.Through the optimization of fluorescent quantitative PCR conditions and reactions, we establish the simultaneous detection of HBV and HCV dual fluorescence quantitative PCR (FQ-PCR) method, and evaluate the method. The results showed that this method linear range of HBV and HCV were 107-102 copy /μL of and 107-102 copy / μL, and correlation coefficients are 0.999. The results of the detection show the positive specimens are positive, and others are negative. The application of this method for assessment of 175 cases of clinical specimens, HBV are positive in 16 cases, 8 cases of HCV positive, HBV and HCV dual positive in two cases.Double FQ-PCR method established in this study is specific, rapid, sensitive, and is important for HBV, HCV blood screening. Keywords: Medical Microbiology; HBV(Hepatitis B virus); HCV(Hepatitis C virus); LNA （Locked Nucleic Acid）; FQ-PCR 35 0 引言 乙肝和丙肝都是全球性公共健康问题。据统计在全球有 3 亿 5 千万人感染乙肝，1 亿 7 千万人感染丙肝[1]。乙肝病毒和丙肝病毒是两种不