Clostridium cellulolyticum D-阿洛酮糖3-差向异构酶的固定化研究.docVIP

  Clostridium cellulolyticum D-阿洛酮糖 3-差 向异构酶的固定化研究# 储菲菲，沐万孟，江波** 5 10 （江南大学食品科学与技术国家重点实验室，江苏无锡，214122） 摘要：本文从 6 种离子交换树脂和吸附树脂中，筛选出固定 Clostridium cellulolyticum D-阿 洛酮糖 3-差向异构酶（DPEase）效果较好的大孔弱碱性苯乙烯系阴离子交换树脂 D380 为载 体，以戊二醛为交联剂，通过先吸附后交联的方法对 DPEase 进行固定化，并对固定化条件 进行了优化。结果表明，最佳固定化条件为：加酶量为 0.4 mL/0.5 g 树脂，吸附时间 120 min， 吸附温度 30 ，吸附 pH 为 7，交联时间 30 min，戊二醛体积分数 0.05%，固定化酶活回 收率可达 20%以上。 关键词：轻工业；D-阿洛酮糖 3-差向异构酶；阴离子交换树脂；固定化 中图分类号：TS241 15 Immobilization of Clostridium cellulolyticum D-psicose 3-epimerase  20 25 30 35 40 CHU Feifei, MU Wanmeng, JIANG Bo (State Key Laboratory of Food Science and Technology,Jiangnan University,Wuxi, Jiangsu 214122) Abstract: In this article, Clostridium cellulolyticum D-psicose 3-epimerase (DPEase) was immobilized by 6 kinds of ion-exchange and adsorption resins, and D380 showed the excellent result for immobilization. The enzyme was immobilized through cross-linkage of glutaraldehyde. The optimum conditions for the immobilization were: added enzyme 0.4 mL/0.5 g resin, 120 min, 30 ℃, pH 7 for adsorption and 30 min for cross-linkage, respectively. The concentration of the glutaraldehyde was 0.05%, and the crosslinking time was 30 min. The activity of immobilized enzyme was above 20%. Key words: Light industry; D-Psicose 3-epimerase; Ion-exchange resin; Immobilization 0 引言 D-阿洛酮糖是近年发现的一种具有特殊保健功能的新型功能性因子，它是 D-果糖在 C-3 位的差向异构体，它的甜度相当于果糖的 70%，能量只有蔗糖的 0.3%，具有低能量、改善 肠道菌群、降低血糖、抗龋齿等生理功能[1-3]。 D-阿洛酮糖可以通过 D-塔格糖 3-差向异构酶（D-tagatose 3-epimerase, DTE）家族蛋白 异构化 D-果糖而获得[4]。由于固定化酶在稳定性、重复使用性、经济成本、特殊工艺需要 等方面较游离酶制剂有着显著的优越性，为了更有效地利用各种游离酶制剂，酶的固定化研 究也一直受到研究者的重视。在稀有糖的生产上，国内外使用的催化酶大都为游离酶，关于 DTE 家族的固定化研究并不多，目前仅有日本香川大学(Kagawa University)Izumori 团队和韩 国世宗大学(Sejong University) Oh 团队对 DTE 家族的固定化进行过报道，国内甚至还是空 白。其中，Izumori 团队选择以 Chitopearl beads 为载体，通过离子交换结合方法固定重组 DTEase，酶结合效率达到 90%[5,6]；Oh 团队则选择 Duolite A568 离子交换树脂对 DPEase 进 行固定化，在硼酸盐存在下，D-阿洛酮糖的转化率达到 65% [7]。 基金项目：教育部博士点新教师基金（200802951024） 作者简介：储菲菲（1986-），女，硕士研究生，酶应用技术 通信联系人：江波（1962-），男，教授，酶应用技术. E-mail: bjiang@jiangnan.edu.cn -