ERM蛋白参与CCL25诱导的白血病细胞MOLT4细胞的迁移.docVIP

  ERM 蛋白参与 CCL25 诱导的白血病细胞 MOLT4 细胞的迁移# 冷俊，张秋萍** 5 10 15 20 25 30 35 40 45 （武汉大学基础医学院，武汉 430071） 摘要：目的：以天然表达 CCR9 的人 T-ALL 细胞系 MOLT4 为对象，研究 CCL25 对细胞形态、 ERM 蛋白的活性及细胞亚定位的影响，以探讨 CCR9 参与白血病细胞浸润转移的可能机制。 方法：运用扫描电镜观察 CCL25 诱导后细胞形态及表面结构的变化。western blot 检测 CCL25 对 ERM 蛋白磷酸化水平的影响；激光共聚焦显微镜观察 ERM 蛋白的细胞定位情况。MOLT4 细 胞 CCL25 诱导前先用十字孢碱预处理，western blot、激光共聚焦显微镜和扫描电镜分别检 测磷酸化 ERM 蛋白的表达、细胞定位和细胞形态的变化。结果：扫描电镜可见低浓度(10 ng/ml )CCL25 对细胞形态的影响不大；100ng/ml CCL25 诱导 2min 后，细胞头端开始出现薄 片状伪足，随着作用时间的延长，极化的细胞数目逐渐增加。10min 后大部分细胞呈典型极 化形态：细胞前缘形成薄片状伪足、尾部形成尾肢。但当 CCL25 浓度达到 1000ng/ml 时，极 化细胞数目骤减，大多数细胞呈圆形。故选取 100ng/ml 进行后续实验。Western blot 结 果显示 CCL25 诱导后，ERM 呈时间依赖性活化，羧基端磷酸化的 ERM（cpERM）的量逐渐增加， 10 分钟后达到高峰，20 分钟以后逐渐减弱。共聚焦结果显示静息细胞中，ERM 蛋白弥散分 布在胞浆、细胞膜，cpERM 的信号微弱； CCL25 诱导 10 分钟后，cpERM 荧光信号增强，且 与总 ERM 共定位于细胞的一极。激酶抑制剂实验发现， ERM 的磷酸化呈激酶依赖性，十字 胞碱可以抑制 CCL25 诱导的细胞极化、ERM 磷酸化及在胞内的极性分布。结论：CCL25 可诱 导 MOLT4 细胞极化，其作用机制可能与 ERM 的细胞亚定位及 ERM 的磷酸化有关。 关键词：CCL25/CCR9；ERM；极化；MOLT4 ERM protein involved in metastasis of MOLT4 cells induce by CCL25 Leng Jun, Zhang Qiuping (Basic medical school, Wuhan University, WuHan 430071) Abstract: Objective: to investigate the effects of CCL25 on the cell shape and the activation of ERM by MOLT4 cells, that naturally express CCR9, to find the possible mechanisms that regulate the lymphocyte trafficking. Methods: CCL25- induced morphology changes were observed by scanning electron microscopy (SEM). Western blot and immunofluorescence were used to detect the phosphorylation and cellular redistribution of ERM proteins induced by CCL25. Kinase inhibitor tests were performed as following: cells were induced by 100ng/ml CCL25 after pretreated with 500nM staurosporine, and then detected the expression of cpERM, the location of ERM and the cell shape changes using the same methods as described above. Results: SEM revealed that low concentration CCL25 exerted little effect on cell shape. Cell polarization could be observed after stimulation with 100ng/ml CCL25 for 2min, and most cells(77.97 ± 0.87％) go