Ezrin参与CCL25诱导T-ALL MOLT4细胞耐药分子机制研究.docVIP

  Ezrin 参与 CCL25 诱导 T-ALL MOLT4 细 胞耐药分子机制研究# 吴冉冉，张秋萍** 5 10 15 20 25 （武汉大学基础医学院免疫系） 摘要：目的: 探讨 CCL25 诱导 MOLT4 细胞耐药的可能机制，明确 Ezrin 与白血病细胞耐药 的相关性。方法：以 ezrin 被干扰的 MOLT4 细胞和野生型 MOLT4 细胞为研究对象进行以 下实验：通过 Western blot，流式细胞术检测 ezrin 基因被干扰前后 MOLT4 细胞内 ezrin 蛋 白的表达水平； MTT 实验检测多柔比星对细胞的增殖抑制作用；多柔比星处理后通过流式 细胞术，共聚焦激光显微镜技术检测细胞内药物蓄积量的变化；流式细胞术检测细胞上 P-gp 的表达，观察 P-gp 阻断剂维拉帕米处理后细胞内药物蓄积量的变化；流式细胞术检测 CCL25 诱导前后细胞内药物蓄积量和 MOLT4 细胞上 P-gp 的表达水平；免疫荧光检测 CCL25 诱导 后细胞上 P-gp 与 ezrin 共定位的情况。结果：Ezrin 表达量的减少导致 MOLT4 细胞对药物 敏感性增加，同时 ezrin 干扰型 MOLT4 细胞内药物蓄积量较野生型明显增加；野生型 MOLT4 细胞上 P-gp 表达水平为 36.9%，而 Ezrin 被干扰后不影响 MOLT4 细胞上 P-gp 的表达，维 拉帕米能抑制 MOLT4 细胞上 P-gp 的药物外排作用，说明 P-gp 在 MOLT4 细胞耐药中发挥 作用；100ng/mlCCL25 处理 10min 后，野生型 MOLT4 细胞内药物蓄积量降低，而 ezrin 干 扰型 MOLT4 细胞药物蓄积量没有改变；CCL25 对 MOLT4 细胞上 P-gp 的表达水平无影响， 但可改变 MOLT4 细胞上 ezrin 和 P-gp 的分布。 结论：CCL25 通过 ezrin 参与 P-gp 介导的 T-ALL MOLT4 细胞耐药。 关键词： 白血病；耐药；Ezrin； P-gp；CCL25/CCR9 中图分类号：R733. 71 Investigating on the role of ezrin in drug resistance of T-ALL MOLT4 cell induced by CCL25 Wu Ranran1, Zhang Qiuping2 (1. Basic Medicine Scholl,Wuhan University,Wuhan,430071; 2. Basic Medicine School,Wuhan University,Wuhan,430071) 30 Abstract: Purpose: In order to investigate a possible mechanism on drug resistance of MOLT4 cells induced by CCL25.Methods: We use the ezrin interfered MOLT4 cells and wild-type MOLT4 cells to perform the following experiments: The expression level of ezrin was detected by Western blot and flow cytometry. The proliferation inhibition of MOLT4 cells was analyzed by MTT assay. After drug treatment ,we detected drug accumulation in the cells by flow cytometry 35 40 45 and confocal laser microscope. We detected the expression level of P-gp in the cells and the amount of drug accumulation in MOLT4 cells by flow cytometry after doxorubicin and verapamil or CCL25 treatment.The colocalization of P-gp with ezrin in cells was tested with immunofluorescence . Results: The sensitivity of MOLT4 cells to drug increased was due to the reduction of ezrin express