抗菌肽Fowlicidin-3的融合表达及其生物活性的初步研究.docVIP

  抗菌肽 Fowlicidin-3 的融合表达及其生物活 性的初步研究# 郭晓敏1,2，胡满1,2，陈剑清1,2，解纯刚1,2，张耀洲1,2** 5 10 15 20 25 30 35 40 （1. 浙江理工大学生命科学学院生物化学研究所，杭州 310018； 2. 浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室，杭州，310018） 摘要：抗菌肽（antimicrobial peptides,AMPs）是生物体先天免疫的保守成分，是大多数 生物体的主要防御体系。Fowlicidin-3 是一种有抗菌活性的鸡源阳离子多肽。根据其氨基 酸序列和大肠杆菌密码子偏爱性，设计合成了一对具有互补序列的上下游引物，在其编码区 的上游引入了羟胺切割位点（Asn-Gly）。PCR 扩增目的片段，将其插入到表达载体 pGEX-4T-1 构建重组质粒 pGEX-4T-1-Fowlicidin-3。将构建好的重组质粒转化入 E.coli BL21（DE3） 中，IPTG 诱导工程菌高效表达融合蛋白 GST-Fowlicidin-3。原核表达的融合蛋白主要以上 清的形式存在，经 Glutathione Sepharose 4B 凝胶亲和层析纯化融合蛋白，Western blotting 和肽指纹图谱证实正确表达和纯化了融合蛋白 GST-Fowlicidin-3。融合蛋白经羟胺剪切缓 冲液切割释放重组抗菌肽 Fowlicidin-3，抑菌实验结果表明，得到了有生物活性的的抗菌 肽 Fowlicidin-3。本研究为筛选开发新型抗菌药物提供选择，以及为建立一种经济有效的 规模化生产抗菌肽的表达纯化系统打下基础。 关键词：分子生物学；抗菌肽；Fowlicidin-3；融合表达；抑菌活性 中图分类号：Q78 Study on the Fusion Expression and Biological Activity Analysis of Fowlicidin-3 GUO Xiaomin1,2, HU Man1,2, CHEN Jianqing1,2, XIE Chungang1,2, ZHANG Yaozhou1,2 (1. Institute of Biochemistry,College of Life Science,Zhejiang Sci-tech University,HangZhou,310018; 2. Zhejiang Provincial Key Laboratory of Silkworm Bioreactor and Biomedicine,HangZhou 310018) Abstract: Antimicrobial peptides (AMPs) are a conserved component of the innate immune response, which is the principal defence system for the majority of living organisms. Fowlicidin-3 is a cationic host defense peptide with potent antibacterial activity isolated from chicken. Based on its amino acid sequences and according to the codon preference of E.coli, a pair primers with reversed complementary nucletide single strand were designed and synthesised. The sequence of hydroxylamine hydrochloride cleavage site (Asn-Gly) was introduced upstream of Fowlicidin-3 code sequence. Primers were templates themselves to amplify Fowlicidin-3 fragment. The amplified fragment was inserted into the express vector pGEX-4T-1 to constructed recombinant plasmid pGEX-4T-1-Fowlicidin-3. The constructed recombinant plasmid was transferred into E.coli BL21 (DE3) and induced by IPTG with the final conc