组织培养技术.ppt

细胞培养技术 绪 论 体外培养 in vitro 组织培养 Tissue culture 细胞培养 Cell culture 器官培养 Organ culture 一、基本概念 组织培养 tissue culture 泛指体外培养 ，包括器官培养、组织培养和细胞培养。 狭义是指从体内取出组织模拟体内生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件下，使之生存和生长并维持其结构和功能的方法。 使用组织块（O.5～1立方毫米）或薄片（厚0.2 毫米） 细胞培养 Cell Culture 用相似方法体外培养单个细胞或单一细胞群，在适宜条件下生长并保持细胞特性，为细胞培养。 器官培养 Organ Culture 应用与组织培养相似的条件，培养器官的原基、器官的一部分或整个器官，使之在体外生存、生长和保持一定功能的方法。 使用器官原基或器官的一部分或整个器宫 概念 细胞融合（cell fusion）： 在体外培养条件下，经化学融合剂、病毒或物理方法等诱发，使不同种的体细胞融合产生一个细胞。 细胞杂交(cell hybridization) 采用细胞融合方法2个或多个不同的细胞融合，形成新的杂交细胞的过程。 细胞系(cell line)： 原代培养物经首次传代成功后即为细胞系。 细胞株(cell strain)： 通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得的均一特殊性质或标志 并能稳定保持这些特性的细胞群。 细胞周期(cell cycle)： DNA复制、细胞增殖过程。细胞从前一次分裂结束开始至本次分裂终了所经历的时相过程，细胞生长的过程有分裂期和分裂间期组成。 细胞一代时间(cell generation time)： 单个细胞两次连续分裂的时间间隔。如，HeLa需24h，CHO细胞仅需12h。 代或世代（generation） 从细胞接种到下一次传代再培养的一段时间。一般3-5天。 原代培养（primary culture） 从体内取出组织或细胞的第一次培养。 传代培养（passage） 将细胞从一个培养器皿中转移或移植到另一个培养器皿中。 单层细胞培养（monolayer culture） 培养细胞有贴壁依赖性，在底物上平铺长成单层细胞。 接触抑制(contact inhibition)： 贴壁生长的体外正常细胞一旦汇合、相互接触后便停止了分裂增殖，不再进入S期，也不会出现交叉重叠生长。 悬浮培养（suspension culture） 细胞或细胞聚集体悬浮于培养液中增殖，这些细胞无依赖于贴附底物或支持物上生长的性质。 群体密度 （population density ） 培养皿内每单位面积或体积内的细胞数，多用细胞数/cm2表示或细胞数/mL表示。 细胞克隆(clone)： 用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单个细胞通过有丝分裂形成纯系的细胞群 ，此过程称为细胞克隆。 建立的细胞系称为克隆细胞株，它们的遗传特性相同。 克隆形成率（cloning efficiency） 向底物接种单个细胞悬液，获得均一的细胞集落的百分率，而且能肯定每个集落的后裔细胞均起源于一个共同的祖细胞。 二倍体细胞系（diploid cell line） 具有两倍染色单体数目，既具有二倍体核型的细胞系。 有限细胞系（finite cell line） 细胞系形成后仅能维持有限传代次数，如二倍体细胞大约传50代。 连续（无限）细胞系 （continuous cell line） 具有无限繁殖能力，即获得了不死性，能反复进行传代的细胞系。如传代细胞系，HeLa细胞。 干细胞（stem cell） 来源于胚胎、胎儿或成体中未分化的具有继续分化潜能的细胞。 胚胎干细胞指来自胚胎期桑椹胚的卵裂球或胚泡的内细胞团，具有自我更新能力和多能性。 细胞凋亡（apoptosis） 由体内外因素触发细胞内死亡程序开启而导致的细胞自杀过程，也称为程序性细胞死亡。 转染（transfection） 用生物学或物理、化学的方法将某细胞的某个基因转移到培养细胞核内的一种实验手段。 体外转化（in vitro transformation） 细胞在体外培养过程中发生了与原代细胞形状不同的转化，并可遗传变异，但不具有致瘤性。 体外恶性转化（in vitro malignant transformation） 细胞在体外培养过程中获得了致瘤性转化，当把这种转化细胞接种于适当的动物后可产生肿瘤。 二、发展史 德国人Roux（1885）用温生理盐水体外培养鸡胚组织并存活数月被认为是组织培养的萌芽试验。 1903年Jolly用盖片悬滴培养法，培养蝾螈白细胞生活一月，提示组织或细胞离体后，在人工培养条