《医学遗传学（哈医大）》基因定位与克隆.ppt

体细胞杂交 TK: chromosome 17 杂种细胞克隆嵌板 - + - + - + - + C - - + + - - + + B - - - - + + + + A 8 7 6 5 4 3 2 1 Human chromosome Hybrid clone 微细胞融合(microcell fusion) 体细胞杂交 人工建立的仅含有一条人类染色体的杂种细胞，即微细胞，再与啮齿类细胞进行融合。 区域定位(regional assignment) 体细胞杂交 依据染色体结构畸变的特点，建立只含有特殊的部分人类染色体的杂种细胞，再与啮齿类细胞进行融合。 辐射杂种(radiation hybrid) 体细胞杂交 用含有辐射切割的人类染色体片段的细胞与啮齿类细胞融合产生的杂种克隆细胞。 1975年，Goss和Harris提出 1990年，Cox构建单染色体杂种细胞 1994年，Walter建立全基因组放射杂种 原位杂交(In Site Hybridization，ISH)：利用同位素标记的DNA探针，与玻片上的中期染色体进行杂交。是一种直接进行基因定位的方法。 原位杂交技术 原位杂交技术 医 学 遗 传 学 基因定位与克隆 本章节重点 基因定位和基因克隆的概念 连锁分析 遗传标记 基因克隆的策略 基因定位(gene mapping)：利用一定的方法将一个基因确定到染色体上的实际位置上。 1911年，Wilson将红绿色盲基因定位到X染色体 1968年，Duffy血型基因定位于1号染色体 基因克隆(gene cloning)：用一定的方法把不同位点上的基因分离出来。 基因定位(gene mapping)：利用一定的方法将一个基因确定到染色体上的实际位置上。 连锁分析(linkage analysis)：利用被定位的基因与在同一染色体上另一遗传座位相连锁的特点，将该基因定位在某一染色体或染色体某一区带上。 连锁分析 连锁分析 连锁分析 连锁分析 连锁分析 连锁分析 重组值(recombination fraction)：是基因定位时两个基因间遗传图距的量度，即基因间的遗传距离。 厘摩(centimorgan，cM) 连锁分析 遗传标记 用连锁分析法进行基因定位时需要的一些已知遗传位点，这些位点应按孟德尔方式遗传，且具有多态性以便显示连锁关系，这些标记位点称为遗传标记（genetic marker）。 血型，血清蛋白，HLA DNA RFLP DNA STR DNA VNTR SNP 遗传标记 重组值＝ 0：10个减数分裂 重组值＝0.3：85个减数分裂 遗传标记 连锁分析 EcoRⅠ EcoRⅠ EcoRⅠ 3.0 kb 1.7 kb 探针 Neurofibroma, NF1 RFLP Ⅰ Ⅱ Ⅲ 1 2 1 2 3 4 5 6 7 8 1 2 3 4 5 6 7 8 连锁分析 Neurofibroma, NF1 RFLP Ⅰ Ⅱ Ⅲ 1 2 1 2 3 4 5 6 7 8 1 2 3 4 5 6 7 8 3.0 kb 1.7 kb 4.7 kb 连锁分析 4.7 kb 3.0 kb Neurofibroma, NF1 RFLP Ⅰ Ⅱ Ⅲ 1 2 1 2 3 4 5 6 7 8 1 2 3 4 5 6 7 8 连锁分析 Neurofibroma, NF1 RFLP Ⅰ Ⅱ Ⅲ 1 2 1 2 3 4 5 6 7 8 1 2 3 4 5 6 7 8 4.7 kb 3.0 kb 连锁分析 1955，Morton: 优势对数法 (Lod) +3表示连锁存在 -2表示连锁不存在 连锁分析 多点连锁定位 利用三点杂交法(three point crosses)，可将某一致病基因定位于遗传标记的框架内，更精确的进行基因定位。 连锁分析 aBc/abc 95 B – × – (A，C) AbC/abc Abc/abc 47