应用反向遗传技术研究流感病毒.pdfVIP

维普资讯 18 福建畜牧兽医 第 29卷 第6期 2007年 应用反向遗传技术研究流感病毒 林 娃 周伦江 庄向生 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 福州 350013 摘 要 反向遗传技术(reveEsegenetics，RG)是一种通过eDNA克隆来拯救RNA病毒基 因组片段，进而复制出设计表型的病毒 的现代生物基因工程手段 ，目前被广泛应用于流感病毒重配株的构建。回顾流感病毒反向遗传技术发展的历史，并介绍 目前 该技术在禽流感疫苗研发方面的实际应用，为禽流感的防治、流感病毒以及其他RNA病毒的研究提供新的思路。 关键词 反向遗传技术 流感 病毒 中图分类号：Q789 文献标识码 ：A 文章编号：1003—4331(2007)06—0018一o4 近 l0年来，高致病性禽流感病毒在世界范围内 胚中高产的PR8质粒系统和经过修饰的禽流感病 的大规模肆虐，造成了包括家禽、野生鸟类、哺乳动 毒血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因重组，生产出 物以及人类的感染和死亡…1。这种极有可能引发大 高产而安全的疫苗毒株，为大规模快速制备流感疫 规模流感大流行的病毒，引起 了国际社会和世界卫 苗提供了技术保障。 生组织(WHO)的广泛关注。历史上，3次流感大流 1 流感病毒复制机理 行给人类的生命财产造成了巨大的损失，其中最为 流感病毒包含一个负义 RNA基因组片段。和 严重的 1918—1919年流感大流行，造成全世界范围 其他负义RNA病毒不同的是，流感病毒的复制需要 约 4000万～5000万人的死亡。 在被感染的宿主细胞核内进行4』。当流感病毒通过 目前，禽流感疫情主要发生在饲养的家禽和野 受体介导的细胞 内吞作用和细胞膜融合后，病毒的 生鸟类身上，已经造成了主要包括东南亚国家，例如 核蛋白(vRNP)复合物释放到细胞质 内。这个包含 印尼、泰国、越南等国的大规模禽类或鸟类死亡 。并 了病毒RNA(vRNA)、核蛋白质(NP)以及 3个聚合酶 且这种病毒随着候鸟的迁移，也蔓延到了其他周边 蛋 白(PA、PB1和PB2)的核蛋 白，随后转运到细胞核 国家，例如中国、太平洋地区、中东地区，甚至延伸到 内，在那里开始转录和复制。这个负义的vRNA(和 欧洲、非洲等地…1。人类感染这种高致病性禽流感 mRNA互补的RNA)并不作为蛋 白合成的模板，而是 病毒的病例也时有发生，目前为止共有 328人患病 ， 需要在聚合酶复合物的辅助下先转录成mRNA。在 其中200人死亡_l2一。WHO的专家们认为，这种高致 复制的过程 中，vRNA作为合成全长互补 RNA(cR． 病性禽流感病毒很有可能获得能够快速在人与人之 NA)的模板，而 cRNA则作为合成后代 vRNA的模 间传播的感染能力，从而引发新一轮的全球流感大 板。这样，流感病毒复制所需的最小功能单位就是 流行。 vRNP复合物。因此，流感病毒的繁殖需要将8个功 疫苗是有效控制流感病毒 、预防感染的重要手 能RNP复合物传递到细胞核中去。 段 。安全有效的流感疫苗将会为我们有效地保护 2 流感病毒反向遗传技术的诞生 禽类饲养业和禽流感高危人群提供 良好的免疫保护 基因工程技术从研发到现在 已经经历过几十年 屏障，减少经济财产的损失。疫苗的生产依赖于高 的历史。然而到了20世纪80年代末期它才被用于 效稳定的流感病毒株。以往 ，通过重组技术构建流 从克隆的DNA质粒中构建完整的流感病毒 J。 感疫苗生产毒株的技术