3 第三章植物器官和组织培养.ppt

第三章 植物器官和组织培养 §1 植物器官和组织培养的基本程序(重点) §2 植物营养器官培养 §3 植物繁殖器官培养 §4 植物组织培养 §1 植物器官和组织培养的基本程序 一、无菌外植体的获得 二、初代培养物的建立 三、形态发生和植株再生 四、培养产物的观察记载 一、无菌外植体的获得 污染是组培的一大障碍。 污染：指在组培过程中培养瓶内滋生菌斑，使 培养材料不能正常生长发育，从而导致 培养失败的现象。 不同植物或同一植物不同器官和组织的带菌程度不同，所用灭菌剂的种类、浓度及灭菌方法也不尽相同。 （一）茎尖、茎段、叶片的灭菌 （二）根、块茎、鳞茎的灭菌 这类材料因生育土中，灭菌较难，所以灭菌前应仔细清洗，或用软刷清洗，并切去受伤部位。 灭菌时应增加灭菌时间或增大灭菌剂浓度。 如0.1%~0.2%的HgCl2中5~12min；OR 70%的酒精浸数秒后用6%~10%次氯酸钠浸5~20min。 （三）花蕾的灭菌 未开放花蕾中的花药处于无菌状态，可以直接灭菌。 灭菌时间和灭菌剂的浓度相对较低。 如70% 酒精蘸10~30s，用0.1%氯化汞浸3~10min或1%次氯酸钠溶液浸10~20min。 （四）果实、种子的灭菌 果实和种子表面具有茸毛或蜡质，所以在灭菌剂中加入几滴吐温-80。 果实：如70% 酒精蘸数秒，2%次氯酸 钠溶液浸10~20min或饱和漂白 粉上清液浸10~30min 。 种子： 10%次氯酸钠溶液浸10~30min或 用0.1%~0.2%氯化汞浸5~10min。 二、初代培养物的建立 即无菌系的建立 污染途径：（1）外植体带菌（2）培养基及接种器具灭菌不彻底（3）接种操作时带入（4）环境不清洁 无菌系的建立要防止污染的产生，并保证培养物能正常的生长发育。 （一）无菌环境 接种材料灭菌； 培养基灭菌； 接种器械和超净工作台无菌； 接种室环境清洁； 对于难灭菌的材料可在培养基中加入抗生素。 （二）规范操作 建立无菌初代培养物时，要求操作技术熟练，经验丰富。 同时操作者严格按照操作要求进行。 对超净工作台、台中的物品表面及操作者双手用75%的酒精擦拭灭菌。 （三）条件合适 培养基 培养基的种类 培养基激素的种类与配比 其他添加物 外植体 外植体的来源 生长发育状况 培养条件 光照、 温度 湿度 三、形态发生和植株再生 四、培养产物的观察记载 （一）愈伤组织 按质地分为两类：紧密型和疏松型 按颜色分为：绿、淡绿、黄、紫 愈伤组织的诱导率： （二）胚状体 （三）芽 芽的发生方式： 丛生芽（顶芽、腋芽） 不定芽（叶片、茎基部） 芽的分化率的计算： （四）根 培养材料转到生根培养基中可诱导不定根。 发根率的统计： §2 植物营养器官培养 一、植物的根段培养 二、植物茎段培养 三、植物的叶片培养 一、植物的根段培养 定义：以植物的根切段为外植体进 行离体培养的技术。 意义：离体根培养是研究根系生理 代谢、器官分化及形态建成 的良好试验体系；对药物的 生产也有重要意义。 （一）根的无性系的建立 1.根的直接增殖 培养基：无机盐含量较低 培养条件：25~27℃黑暗培养 培养方式：固体培养、液体培养 和固液双层培养 2.根的间接增殖： 经过愈伤组织后形成植株 3.根的形成过程 根原基的形成和根原基的伸长和生长 （二）影响离体根发生和生长的因素 1.基本培养基 基本培养基具有满足离体根发生和生长所需的无机盐。 一般MS（或1/2 MS、1/3 MS）、B5、White等都可以。 大量元素：硝态氮、Ca；P和K有利于根的发生，但不宜太多。 微量元素：B、Fe 维生素B1和B6 缺少生根受阻，浓度范围 0.1~1.0mg/L 碳源以蔗糖为好，1%~3%。 2.植物生长调节剂 培养基中添加适当的生长素有利于生根，但所需要的生长素的种类和浓度是不一致的。 如毛白杨不定根的产生： IBA：浓度为0~0.5 mg/L时，生长显著。 浓度高于0.5 mg/L时，生长量较小。