草酸青霉外切葡聚糖酶基因(cbh1) 克隆及其在毕赤酵母中的表达和重组外切葡聚糖酶特性分析.pdfVIP

11 1 农业生物技术学报，  年， 第  卷， 第  期， 第  页  2011 19 6 1127~1135 JournalofAgriculturalBiotechnology,2011,Vol.19,No.6,1127~1135  研究报告  ALetter  草酸青霉外切葡聚糖酶基因 cbh1 克隆及其在毕赤酵母中的表达和重组 ( ) 外切葡聚糖酶特性分析 赵萱 1,2  1*  3  1  1,2  2  1  1  顿宝庆  顾金刚  王智  田谷  许修宏  路明  李桂英  1 100081 2  中国农业科学院作物科学研究所， 国家农作物基因资源与基因改良重大科学工程， 中国农业科学院生物质能源研究中心， 北京  ； 东 北农业大学生命科学学院， 哈尔滨 150030 3 100081  ； 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所， 中国农业微生物菌种保藏管理中心， 北京  * baoqingdun9@  通讯作者， 摘 要 木霉的纤维素酶系中通常缺少 茁  葡萄糖苷酶， 导致了终产物抑制， 木霉生长速度明显没有青霉快， ­ 因此， 来源于青霉的纤维素酶受到了越来越多的重视。通过热不对称交错 PCR(TAIL­PCR)技术从草酸青霉  (Penicillium oxalicum)M菌株中克隆得到外切葡聚糖酶基因 cbh1(GenBank 登录号:HQ843504)。该基因全长 为  ， 无内含子序列， 编码  个氨基酸， 具有  ，  和  典型催化残基， 推测属于糖 1641bp 547  Glu236 Asp238  Glu241  基水解酶第 7 家族。将 cbh1 克隆到毕赤酵母表达载体 pPIC9 中， 构建重组表达质粒 pPIC9­cbh1 ， 电击转入 毕赤酵母(Pichia pastoris )GS115 菌株。阳性重组子经测序及活性分析表明，cbh1 基因成功分泌表达， 表明来 源于草酸青霉的外切葡聚糖酶基因首次在毕赤酵母中获得成功表达。重组酶活性分析表明， 其活性可达 56  ， 最适反应  、 温度分别为  和  ， 且  和温度稳定性均较好。研究结果认为，cbh1 基因的克隆 IU/mg pH 6.0  55℃ pH 丰富了纤维素酶的基因资源， 其在毕赤酵母中的成功表达也为该类纤维素酶基因高效工程菌株的构建提供 了基础。 关键词 外切葡聚糖酶， 毕赤酵母， 表达， 酶学性质  茁   cbh1 Penicillium Cloning of an exo­ ­1,4­D­glucanases Gene ( ) f