乙酰半胱氨酸通过激活信号途径抑制过氧化氢诱导骨髓间充质干.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１３，３３（１１）：１７ 檪檪檪檪檪檪檪檪殏 檪 殏 檪 研究报告檪 殏 檪 殏檪檪檪檪檪檪檪檪 Ｎ乙酰半胱氨酸通过激活ＰＩ３ＫＡｋｔ信号途径抑制 过氧化氢诱导骨髓间充质干细胞凋亡 １，２ ３ １ １ ３ １，２ １，２ １，２ 谢荣辉 　殷嫦嫦 　殷　明 　陈伟才 　邬亚华 　何丁文 　林思文 　耿书国 （１南昌大学第二附属医院　南昌　３３０００６　２南昌大学研究生院医学部　南昌　３３０００６　３九江学院　九江　３３２０００） 摘要　目的：研究Ｎ乙酰半胱氨酸（ＮＡＣ）对ＨＯ诱导骨髓间充质干细胞（ＢＭＳＣｓ）凋亡的影响， ２ ２ 并探讨Ｎ乙酰半胱氨酸对骨髓间充质干细胞的ＰＩ３ＫＡｋｔ信号通路的影响。方法：采用全骨髓贴 壁培养法培养ＳＤ大鼠ＢＭＳＣｓ，随机分成５组：正常对照组、ＨＯ 处理组、ＮＡＣ组、ＮＡＣ＋ＨＯ 组 ２ ２ ２ ２ 和ＬＹ２９４００２干预组。倒置相差显微镜观察各组细胞形态变化；ＭＴＴ法检测不同浓度ＨＯ、ＮＡＣ ２ ２ 刺激组细胞存活率；流式细胞术检测各组的细胞凋亡率；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测各组ｒＢＭＳＣｓ中Ａｋｔ，ｐ Ａｋｔ的表达。结果：ＨＯ 可诱导ＢＭＳＣｓ发生凋亡，其存活率与 ＨＯ 浓度呈依赖性改变，其形态 ２ ２ ２ ２ 呈典型的凋亡样改变；与ＨＯ 组相比，正常对照组、ＮＡＣ＋ＨＯ 组的凋亡率均降低；与ＬＹ２９４００２ ２ ２ ２ ２ 干预组相比，ＮＡＣ＋ＨＯ 组的凋亡率降低，ＨＯ 组与之没有统计学差异；与正常组相比，ＮＡＣ能 ２ ２ ２ ２ 刺激磷酸化Ａｋｔ水平升高，并与作用时间长短有关；与ＨＯ 组相比，ＮＡＣ＋ＨＯ 组的ｐＡｋｔ表达 ２ ２ ２ ２ 量升高，而ＬＹ２９４００２干预组与ＨＯ 组的ｐＡｋｔ表达量未见明显差异。结论：Ｎ乙酰半胱氨酸可 ２ ２ 通过激活ＰＩ３ＫＡｋｔ信号通路对过氧化氢诱导的骨髓间充质干细胞凋亡起到保护作用。 关键词　Ｎ乙酰半胱氨酸　过氧化氢　骨髓间充质干细胞　凋亡　ＰＩ３ＫＡｋｔ信号通路 中图分类号　Ｒ２７３ 　　在过去的１０年中，成人骨髓间充质干细胞作为治 氧化应激环境中的存活率和对氧化应激损伤 ｒＢＭＳＣｓ 疗载体已运用到多种疾病治疗当中，已经成为一种组 起保护作用，以及与ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ信号通路的关系，为干 织修复的细胞工程治疗方法。然而，相当部分的供体 细胞移植联合药物来改善干细胞存活、提高其修复效 细胞在移植后数小时内死亡，从而影响了移植的最佳 率提供一定的实验依据。 效果。缺氧环境可诱导细胞凋亡，而且可能是造成在 １　材料与方法 体内外移植的骨髓间充质干细胞大量流失的主要原 因［１］。因此，在缺氧条件下保护骨髓间充质干细胞免 １．１　材　料 受氧化凋亡是提高细胞治疗效率的关键。 １．１．１　动物　清洁级４周龄ＳＤ大鼠４只，雌雄不限， 　　大量研究表明，Ｎ乙酰半胱氨酸具有较强的抗氧 体重约４０ｇ，ＳＤ大鼠购自湖南斯莱克景达实验动物有