高效液相色谱测定发酵液中13二羟基丙酮（）方法的建立.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，２８（１）：６１～６４ 高效液相色谱测定发酵液中 １，３二羟基丙酮（ＤＨＡ）方法的建立 ?  饶志明 　徐美娟　沈　微　方慧英　诸葛健 （江南大学工业生物技术教育部重点实验室 江南大学工业微生物研究中心　无锡　２１４１２２） 摘要　建立了简单且准确的测定 １，３二羟基丙酮（ＤＨＡ）的高效液相色谱（ＨＰＬＣ）方法。以 ? ＡｌｌｔｉｍａＣ１８（５ｍ，２５０×４．６ｍｍ）为分离柱，５％甲醇水溶液（０．０５％ＨＰＯ 调ｐＨ至３．０），流速为 μ ３ ４ １ｍｌ／ｍｉｎ，用紫外检测器在２００ｎｍ处检测ＤＨＡ。结果测得 ＤＨＡ标准样品的保留时间为６．２ｍｉｎ， 并测得ＤＨＡ的线性范围为０．１～１０．０ｇ／Ｌ，用ＨＰＬＣ法测得以甘油为底物发酵产 ＤＨＡ发酵液中 ＤＨＡ含量为６．２ｇ／Ｌ，并证明高效液相色谱法可有效应用于产ＤＨＡ发酵过程中产物的检测。 关键词　１，３二羟基丙酮　高效液相色谱　检测 ? 中图分类号　Ｑ８１９ 　　１，３ 二羟基丙酮，又称二羟丙酮，英文名为 显色———二苯胺显色测定法的进行了精确性比较。由 ? ０～０．３ｇ／Ｌ），用高效液相色谱 ｄｉｈｙｄｒｏｘｙａｃｅｔｏｎｅ，简写为 ＤＨＡ，是最简单的多羟基酮 于显色法线性范围很窄（ 糖，是唯一一个没有手性碳原子的糖，带有甜味的白色 法来分析检测发酵体系中的ＤＨＡ具有现实意义，为本 或类白色粉末状结晶，易溶于水及乙醇、丙酮和乙醚等 实验室筛得的以甘油为底物产 ＤＨＡ菌株的工业化应 有机溶剂。ＤＨＡ用途广泛，且使用量大，是一种重要的 用打下了良好的基础。 医药中间体、化工原料和食品添加剂、化妆品防晒剂的 １　材料与方法 成分［１，２］。也可作为一种抗病毒试剂，如在鸡蛋胚胎培 养中，能杀死５１％～１００％的鸡瘟病毒；还可用于果蔬、 １．１　材　料 ［２，３］ １．１．１　仪器与试剂　高效液相色谱仪：Ａｌｌｔｅｃｈ４２６ 水产品、肉制品的防腐保鲜 ；仍有许多其它用途在 积极的研究和开发之中。 ＨＰＬＣＰｕｍｐ；ＬＩＮＥＡＲＵＶＩＳ２００紫外检测器；微孔滤膜 ［２］ 为孔径０．４５ｍ，上海亚东核级树脂有限公司；其余试 　　ＤＨＡ的分析方法 有化学定性、酶法分析、薄层色 μ 谱、纸层析、高效液相色谱等方法，其中薄层色谱分析 剂均为国产分析纯。 １．１．２　样品　１，３二羟基丙酮（ｄｉｈｙｄｒｏｘｙａｃｅｔｏｎｅ 法所用试剂昂贵且准确定量困难。国内有报道采用了 ? ? ［４］ ｄｉｍｅｒ）标样购于Ｓｉｇｍａ（ＵＳＡ）公司，待测样品为产ＤＨＡ 气相色谱分析法 来定量测定ＤＨＡ，由于ＤＨＡ的挥发 性不高，需要先将其衍生化为易挥发且稳定性较高的 菌种接种甘油发酵培养基 ３０℃培养 ３ｄ后取发酵上 衍生物才可间接测定 ＤＨＡ含量，但此方法预处理复 清液。 １．２　方　法 杂，且衍生化过程中水分的影响较大，需要加入大量的