一种安全高效的血红蛋白纯化方法.pdfVIP

中国生物工程杂志 技术与方法 一种安全高效的血红蛋白纯化方法 臧家涛 刘建仓徐 竞 李东红 刘良明 第三军医大学野战外科研究所重庆 摘要 目的建立一种适用于大量制备的安全高效的血红蛋白纯化方法 方法 将压积红细胞 装入透析袋 以含有还原剂的 缓冲液透析破碎 破碎的上清经两级硫酸铵沉淀后透析至上样 缓冲体系 离心后取上清即得血红蛋白提取液 红细胞提取液通过阴离子交换柱层析进一步分 离 计算回收率 纯化产物浓缩后以 及 鉴定纯度 进行紫外 可见光谱扫描并以 血气分析仪分析血气指标以鲎试剂测定内毒素含量以磷测定法测定脂质含量 结果 血红蛋白提取液中脂质去除率 容易通过 滤膜经阴离子交换层析纯化的血红蛋白 经银染法及分析没有杂蛋白条带分析纯度总回收率 内 毒素含量 高铁血红蛋白含量 结论 该血红蛋白纯化方法安全高效成本低廉易 于放大生产具有较好的应用前景 关键词血红蛋白 阴离子交换层析硫酸铵沉淀 纯化 中图分类号 由于以人红细胞为载体的传统输血方法本身存在 水线生产为国外制药公司所广泛采用但超滤膜需要 的交叉感染输血反应及红细胞存储期短等问题以无 经常更换成本高昂势必限制血红蛋白携氧产品的推 基质血红蛋白为载体的新型携氧材料的开发几十年 广应用柱层析法成本低重复性好对血红蛋白的空 来一直是众多医学科研工作者研究的主要内容之一 间结构没有影响安全高效是最有前景的血红蛋白纯 在这个领域发达国家处于领先的位置有多个公司的 化方法 产品进入 期临床 已有的以无基质血红蛋白 目前文献报道的血红蛋白纯化方法多采用阴离子 为载体的携氧材料包括分子内交联 交换柱层析法将压积红细胞低渗破碎并高速离心取 血红蛋白 上清 脂质体修饰的血红蛋白 聚乙二醇 再通过阴离子交换柱纯化 本实验室在采用上 修饰的血红蛋白 聚合物包裹的血红蛋白 述方法小规模纯化血红蛋白时并未发现问题但在放 以及基因工程重组表达的血红蛋白 等 除了基因工 大生产时发现两个比较严重的问题 首先红细胞膜 程重组表达血红蛋白以外大部分血红蛋白都来源于 脂质含量很高通过离心红细胞破碎液的方式难以去 动物包括牛猪人等 利用这些动物源血红蛋白首 除脂质 脂质与阴离子交换填料结合紧密降低了柱 先需要将血红蛋白从红细胞中分离纯化出来 已有的 效因此通常每上样等柱床体积量的压积红细胞必须 血红蛋白纯化方法包括超滤法 加热法 萃取 执行一次柱清洁程序 柱清洁程序耗费大量乙醇和冰 法 柱层析法 加热法萃取法对血红蛋白的空间