苜蓿愈伤组织的诱导和再生体系的建立.pdfVIP

维普资讯 现代农业科技}2008年第 10期 园艺博览 苜蓿愈伤组织的诱导和再生体系的建立 徐长绘 1,2 周洪荣 张大明 (苏州大学．江苏苏州 215004； 山东丝绸纺织职业学院； 山东新华制药集团) 摘要 以改 良SH 为基本培养基，研 究了不同激素配比和不同外植体对苜蓿愈伤组织诱导的影响，筛选出诱导愈伤组织的最佳外植体 是下胚轴、最佳培养基为 SH+2．4-D2mg／L+KT0．2mg／L；继代 增殖后对愈伤组织进行分化再生培 养，研 究了附加不 同浓度外源激素的 MS和改 良SH培养基对愈伤组织分化的影响 ．确定最佳分化培养基为改 良sH+NAA0．1mg／L+KT0、5mg／L。 关键词 苜蓿；愈伤组织；诱导；分化 中图分类号 $551．7、035．3 文献标识码 A 文章编号 1007—5739(2008)10—0017—01 苜蓿 (Me~cagosatma)是豆科 多年生草本植物 ，素有 “牧 2％．琼脂 0．7％．水解酪蛋白250mg／L，肌醇 100mg／L。每种培 草之王”、“维他命饲料”的美誉。在我国，苜蓿被大面积推广 养基处理 15瓶 ．每瓶接种 5块愈伤组织 。将分化出芽 的愈 栽培 ．并为农牧业发展及环境改善发挥着巨大的经济效益 伤组织转入根的诱导培养基 ，即 1／2MS附加 IAA0．5mg／L、 和生态效益。但苜蓿有培育周期长 、见效慢 、病虫害无法消 蔗糖浓度 2％、琼脂0．7％的培养基。 除、干物质消化率难以提高等缺点 ，不能满足畜牧业对其 目 2 结果与分析 一 益增长的需求。随着分子生物学和植物基因工程的发展 ，人 2．1 不同外植体对苜蓿愈伤组织诱导的影响 们借助生物技术手段建立高频 、高繁 、高效 的苜蓿再生体 观察上述 4种外植体 的生长情况 ，发现均能诱导愈伤 系．成为现在苜蓿遗传改 良的重要途径 。本试验通过研究不 组织 ，但存在明显差异 (见表 1)。首先 ，试验发现不同外植体 同外植体和不同外源激素组合的培养基对苜蓿愈伤组织的 的污染率与其制备方法有关。截取的无菌苗外植体污染率 诱导、芽分化的影响，以期建立高频快繁稳定的苜蓿再生体 均较低 ．下胚轴 、茎段 a为零污染 ，而茎段 b的污染率高达 系．为进一步实施苜蓿基因的遗传转化奠定基础。 27．7％。可见 ．从无菌苗上选取培养材料较选取成体植株更 1 材料与方法 为理想。其次 ．试验发现不同外植体形成愈伤组织的时间不 1．1 试验材料 同。下胚轴接种 2d后开始膨大 ，4d后可见愈伤组织 ，12d左 供试苜蓿品种公农 1号，来源于黑龙江省畜牧研究所。 右达到高峰期：而茎段b明显膨大需 9d左右 ，愈伤组织 12d 1．2 试验方法 后才出现 ．3周内没有出现高峰期。再次 ，试验重点观察统计 1．2．1 无菌苗 的培养。选取饱满有光泽 的种子 ，用 自来水冲 不同外植体的愈伤组织诱导情况 ，发现下胚轴愈伤组织平 洗 45min，滤纸吸干后 ，用70％酒精漂洗 0．5min，0．1％氯化 均诱导率最大 ．可达 92．8％；其次 是茎段 a、子叶、茎段 b。综 汞溶液消毒 10min，无菌水冲洗 4~6次 ，接种 于无激素 的 合上述可知．下胚轴是诱导愈伤组织的最佳外植体。 MS培养基 中，28℃的培养箱中萌发。 表 1 不 同浓度激素配 比的培养基对不 同外植体愈