CKD-602對口腔癌細胞進行細胞凋亡的作用.docVIP

書報討論 Apoptotic effect of CKD-602 (Camtobell) on oral squamous cell carcinoma cell lines 評估CKD-602對口腔癌細胞進行凋亡的作用 作者：Yong-Ju Ok, Hoon Myoung, Young-Kyun Kim, Jong-Ho Lee,Myung-Jin Kim, Pil-Young Yun 出處：Oral Oncology (2009) 45, 266–272 姓名：醫技所1-1 0981118010 陳彥安 報告日期：2009/10/23 評估CKD-602對口腔癌細胞進行凋亡的作用 摘要： 作者研究的目的是要評估CKD-602對OSCC細胞進行細胞毒殺的作用，評估因細胞凋亡而死掉的細胞，辨別細胞凋亡所傳達的分子訊號。使用CKD-602處理人類OSCC細胞株包括A253，HSC-3和KB細胞株。再使用流式細胞儀分析細胞凋亡的比例。使用西方墨點法檢測Bax，Bcl-2，和p53的基因表現。CKD-602對OSCC細胞株具有非常好的細胞毒殺作用。大部分細胞死亡的原因是因為細胞凋亡。經CKD-602處理後，A253、HSC-3的Bcl-2和KB細胞的p53之基因表現均因CKD-602的誘導而下降。 前言： 鱗狀細胞癌是最常發生於頭部和頸部的惡性腫瘤，頭部和頸部就佔了90﹪以上。在韓國，估計約20﹪的頭部和頸部癌症發生於口腔。口鱗狀細胞癌的預後很差是因為局部侵襲之後接著轉移。一般治療OSCC是進行手術、放射療法、化學治療。當中已經使用不少的化療藥物用於治療OSCC。可是，現在使用化療藥物治療並沒有改善化療藥物殘留於病人體內的比例。為了改善此情況，必須發展新的藥物。 Camptothecin是一種從Camptotheca acuminate所分離出來的抗癌植物鹼。在動物試驗中，CPT對於大部分的癌症具有很好的療效。然而由於毒性過強，使用sodium salt進行試驗是失敗的。在1985年，鑑定CPT以Topoisomerase I當作分子目標，CPT會誘導中度的topoisomerase I反應而形成可逆可切開的複合物，造成共價反應使關鍵的細胞損壞。後來的研究成功使用CPT將人類Topoisomerase I當作分子目標做為抗癌藥物。事實上Topoisomerase I是一種新的分子目標進一步促進CPT。確認CPT的機制之後，開始執行活化結構的研究，著重於CPT分子的三個蛋白：E-ring、A-ring、B-ring。E-ring lactone和在20位置的alpha hydroxyl group是必要的，可以穩定Topoisomerase I-DNA化合物。改變A-ring、B-ring使CPT化合物增加水溶性和活性。這些CPT開始在臨床上使用例如topotecan和irinotecan。附加的camptothecin衍生物例如homocamptothecin和silatecans可用在不同時期的臨床發展。CKD-602是最近合成的新藥，其中位於7的B-ring是水溶性族群(圖1)。 CKD-602的臨床研究證明可廣泛的對抗不同的人類癌細胞株，而且效果比camptothecin更好。然而，尚未有人使用CKD-602測試抗OSCC細胞株的效果。同樣的，雖然CKD-602的分子目標已經完整的建立，但有效抗癌的分子基本成分尚待確定。目前已知細胞凋亡可調控不同Bcl-2的家族成員，特別是Bax/Bcl-2。另一方面，p53可經由誘導細胞凋亡調控細胞毒殺藥物的敏感性。此外，p53藉由增加Bax的量和降低Bcl-2的量誘導細胞凋亡。無論如何，尚未有人測試CKD-602使否會對OSCC細胞株的Bax和Bcl-2造成影響。 研究的目的是要評估CKD-602對OSCC細胞株進行細胞毒殺的影響，評估因細胞凋亡而死掉的細胞，鑑定參與細胞凋亡的分子訊號。 材料和方法： 細胞株和細胞培養 三株OSCC細胞株，A253(頜下腺HSC-3 (舌頭鱗狀細胞癌)，KB (口腔黏膜鱗狀細胞癌)。所有的細胞株皆由韓國細胞株銀行獲得。 每一株細胞株皆培養在RPMI培養液並加入加熱去補體的10﹪胎牛血清，100 ug/ml streptomycin和100 IU/ml penicillin。培養在flasks，培養於37℃ 5% CO2的大氣培養箱。轉移flask時，每個細胞株都要用phosphate-buffered saline洗過一次，中和RPMI，並使用0.05% trypsin/0.02% EDTA溶液分離細胞株。 試劑 1ug的CKD-602溶解於1ml的超純水，1ug/ml是裝在試管中的最高濃度，可存於-20℃。使用培