遗传性癫痫大鼠海马组织Ca^2＋／Cav1．2／CaM／CaMKH信号通路的异常变化.pdfVIP

中国药理学通报 ChinesePharmacologicalBulletin 2013Jan；29(1)：31-6 ·31· 网络出版时间：2012—12—2511：29 网络出版地址：http：／／www·cnki·net／kcms／de~ail／34-1086·R2·0121225-1129·008·html ◇论 著◇ 遗传性癫痫大鼠海马组织 Ca ／Cav1．2／ CaM／CaMKII信号通路的异常变化 吕昕瞳 ，封 瑞 ，蔡际群 ，徐晓雪 ，马丽华 ，何桂林 ，胡慧媛 ，赵金生 ，赵美眯。，郭 凤 (1．中国医科大学药学院药物毒理学教研室，辽宁 沈阳 110001；2．辽宁省辽阳市第三人民医院，辽宁 辽阳 111000； 3．中国医科大学附属一院神经内科，辽宁 沈阳 110001) doi：10．3969／j．issn．1001—1978．2013．01．008 素，参与癫痫的发病及治疗 J。本研究选取癫痫的 文献标志码：A 文章编号：1001—1978(2013)01—0031—06 发生、发展及治疗均与人类癫痫相似的遗传性癫痫 中国 图 书 分 类 号：R一332；R322．81；R329．24；R384．1； 大鼠 (Tremor，TRM)作为实验动物模 型，采用 R742．102．2 Westernblot法、免疫荧光双标法和激光共聚焦显微 摘要：目的 研究遗传性癫痫大鼠 (tremor，TRM)海马组织 镜研究 TRM海马组织中[ca ]j、Ca1．2、CaM和 电压门控性 L型钙离子通道 仅1C亚单位 (Ca1．2)、钙调蛋 CaMK11的变化，探讨癫痫中神经细胞膜兴奋性的产 白 (CaM)、钙调蛋白依赖性蛋 白激酶 Ⅱ(CaMKⅡ)和细胞 生机制和癫痫的发病机制。 内钙离子浓度 ([ca“]i)的变化情况。方法 应用West— 1 材料与方法 ernblot法与免疫荧光双标法检测 TRM海马 CA1、CA3和 1．1 实验动物 6TRM和 Wistar大鼠，清洁级， DG区Ca1．2、CaM和磷酸化CaMKⅡ(p-CaMKII)的蛋白 表达及分布；激光共聚焦显微镜检测 TRM海马组织 中 10—12周龄，体质量 ：150—200g，TRM 由本实验室 [ca“]．。结果 与正常Wistar大鼠相 比，TRM海马组织中 2000年从 日本京都大学引进遗传性癫痫动物模型 Ca1．2和CaM的蛋白表达明显升高 (P0．01)，而p-CaMK 种 鼠并 自行繁殖培养；由于TRM是东京Wistar大鼠 Ⅱ的蛋白表达明显下降 (P0．01)；免疫荧光双标法结果显 突变系的子代，故本研究选择 Wistar大鼠作为对照 示 ：Ca1．2、CaM、p-CaMKⅡ在CA1、CA3区的锥体细胞和DG 组，由中国医科大学实验动物部提供。 区的颗粒细胞群表达丰富，同时ca1．2与CaM、p-CaMKⅡ 1．2 药品及试剂 兔抗．Ca1．2单克隆抗体 (德国 与 CaM在海马各区域均存在共定位；激光共聚焦显微镜检 Abcam)；小鼠抗．CaM多克隆抗体、兔抗．CaMKⅡ多 测TRM海马细胞 [ca ]i明显增强 (P0．01)。结论 克隆抗体、兔抗一P．CaMKII多克隆抗体 (美国Santa Ca“／Ca 1 ． 2／CaM／CaMKⅡ通路的异常变化可能参与遗传 Cruz)；Fluo一3／AM 荧 光探 针 (美 国 Molecular 性癫痫大鼠的癫痫发生与发展。 Probes)；胰蛋 白酶