3种定量检测绵羊肺炎支原体方法的比较.pdfVIP

中国畜牧兽医 2013年第40卷第3期 疾病防治 ·177· 3种定量检测绵羊肺炎支原体方法的比较 何曼莉，费磊，岳华，汤承 (西南民族大学生命科学与技术学院，四川成都610041) 摘要：本研究采用改良Thiaucourt’S培养基培养绵羊肺炎支原体(Mycoplasma PCR)法进行定量，并绘制MO 集不同时间的培养物，分别用颜色变化单位(CCU)法、浊度法及实时荧光定量PCR(Real—time h为SC01的迟缓期，4～16h为对数生长期，lg 生长动态曲线。CCU检测结果显示，接种后o～4 0．4700，16～20h为稳定期，20h以后进入衰亡期；浊度法定量检测结果显示，SCOI培养物经过5倍浓缩后的D4zo。随着培养时 hD42。。增加较缓慢，而12～24h增加最快，24 间延长逐渐上升，2h时为0．0028_+0．0002，4～12 后则趋于稳定；Real-timePCR法检测结果显示，SC01的拷贝数随着培养时间延长平稳上升，2 0．0048，在30 PCR 法、CCU法与浊度法、Real-time Real—time h内均高度相关，相关系数为0．912。经对检测所需时间及精确度 PCR法和浊度法对MO的定量检测结果则在2～30 等方面综合比较，本研究认为Real-timePCR法具有快速、准确及易标准化等特点，可以取代CCU法和浊度法用于MO的定量。 关键词：绵羊肺炎支原体；颜色变化单位；浊度；实时荧光定量PCR 中图分类号：S852．62 文献标识码：A 文章编号：1671—7236(2013)03—0177—04 量。CCU法具有定量准确，且能精确反应MO的生 支原体(Mycoplasma)是目前己知能够独立生活 长繁殖规律等优势，是MO定量的经典方法，但存 没有细胞壁的原核微生物，属于软皮体(Mollicutes) 在耗时、易污染等缺陷(许健等，2011)；而浊度法也 纲支原体目(Mycoplasmatales)中一类原核微生物 存在精确度低、稳定性差等不足(丁敏，2008)；实时 (Nicolet，1996)。据文献报道至1996年为止已经分 离出的支原体近160种，在世界各地广泛分布，种类 荧光定量PCR技术(Real-timePCR)由于检测速度 快、灵敏度高、精确性好、易于标准化等优点，被广泛 多，影响面广，危害大(曹玉璞等，2000；Jasper，1981； Thomas等，1981；Karl—Erik等，1989)。绵羊肺炎支原 见用ReaLtimePCR法对MO进行定量的报道。本 体(M．ovipleuneniae，MO)最早是由Mackay等(1963) PCR法及对 从患有肺腺瘤的绵羊肺脏中分离得到，能引起绵羊及 研究旨在比较CCU法、浊度法ReaLtime 山羊非典型肺炎，此后在其他多个国家和地区陆续发 MO的定量检测结果，旨在寻找一种更加快速、准确 的MO定量检测方法。 现(Patel等，2008；Besser等，2008；Parham等，2006)。 该病在中国也普遍存