60Co-γ射线对苜蓿AFLP多态性的影响.docVIP

60Co-γ射线对苜蓿AFLP多态性的影响 摘要：以干种子经60CO-γ射线处理后在实验室中萌发的苜蓿幼苗为材料提取基因组DNA并进行AFLP扩增。通过引物筛选和反应参数的优化，构建出以苜蓿幼苗为材料的AFLP程序，并从中得到较为清晰的AFLP指纹图谱。经过AFLP图谱观察，发现4个苜蓿品种间扩增产物表现出一定的多态性，每个品种均发现了一些差异带。经辐射处理后，AFLP扩增带有所增加，并在不同品种之间及不同处理之间表现出一定的差异，为苜蓿辐射效应评价和辐射诱变机制提供了一些分子生物学方面的证据。本研究也为开展苜蓿AFLP的多态性分析及AFLP分子标记在苜蓿选育种方面的应用积累经验和提供借鉴。 关键词: 苜蓿；辐射；AFLP Effects of 60Co-γ Radiation on Genetic Diversity of Medicago sativa based on AFLP Abstract: Seeds of 4 alfalfa cultivars (Medicago sativa) were radiated by 1000 Gy and 2000 Gy 60Co-γ ray and then germinated. The AFLP amplifications of genomic DNAs from the germinations were studied. An AFLP procedure was constructed through primers selection and optimization, clear AFLPfingerprints was determined. The experimental results showed that AFLP diversity was present among different cultivars, and each cultivar showed some difference. After 60Co-γ ray radiation, the increase of AFLP bands existed something different among treatments from different cultivars. The results provided some of molecular biological evidences for evaluation of radiation effects and mutation mechanism. Key words: Medicago sativa；γ-ray radiation；AFLP；genetic diversity 1 前言 苜蓿 (Medicago sativa )为豆科苜蓿属植物。苜蓿属共含56个种， 依生育期的不同分为一年生和多年生两大类群。一年生苜蓿以自花授粉为主，多年生物种全部为异花授粉。苜蓿是世界上栽培最早、分布面积最广的优质豆科牧草之一，在我国已有两千多年的栽培历史，主要分布在西北和华北地区，种植面积约1.33×107 hm2。苜蓿中蛋白质含量约占总干物质量的17％～20％，与其它豆科牧草相比，其营养价值被列为各种牧草之首。又由于其高产、稳产、易栽培等特点，素有“牧草王”之美誉[1]。 苜蓿作为一种重要的豆科饲料作物，已成为植物分子生物学研究的模式植物之一。其主要原因在于：苜蓿的基因组较小，与其它豆科植物有一定的同源性，在倍性水平上容易操作，其再生体系建立和组织培养技术也较为完善[1-2]。AFLP分子标记技术已广泛用于生物学的各个领域，如遗传学图谱构建、种质鉴定、遗传多样性等[2-8]。虽然RFLP、RAPD应用于苜蓿的研究已经有相当的进展，而苜蓿AFLP研究只见零星的报导[3-6]。本研究用4个品种的苜蓿种子进行辐射处理，以幼苗提取基因组DNA并进行AFLP扩增，观察其遗传多态性及辐射后所引起的变化，为苜蓿植物资源的进一步开发利用提供分子生物学上的依据。 2 材料与方法 2.1 植物材料 本试验所使用的苜蓿品种为：巨人苜蓿、熬汉苜蓿、草原一号以及草原二号，由内蒙古草原站提供。取干种子进行辐射处理（在华南农业大学辐照中心进行），分别设1000 Gy和2000 Gy两个水平，以未经辐射处理者为对照。对照与处理的种子经70%乙醇表面消毒后用蒸馏水洗净，再用蒸馏水浸种过夜，排列于垫有滤纸的培养皿中，加入适量的蒸馏水在室温下萌发。分别于2d、4d、6d后对全部样品进行DNA提取，并将DNA样品贮存于-20℃冰箱中备用。 2.2 实验方法 2.2.1 DNA的提取： DNA的提取采用鼎国AFLP试剂盒所附送的DNA提取试剂盒，