1型HIV感染多重PCR检测方法的建立及临床应用.pdf

2010正 l2月 首 都 医 科 大 学 学 报 Dec．2010 第 31卷 第 6期 JournalofCapitalMedicalUniversity V01．31 No．6 [doi：10．3969／j．issn．1006-7795．2010．06．001] ·HIV／AIDS基础 与 临床 研 究进 展 · 1型HIV感染多重PCR检测方法的建立及临床应用 代丽丽 陈德喜 石 英 魏飞力 刘志英 张洪海 吴亚松 梁连春 吴 昊 张 彤 (首都医科大学附属北京佑安医院感染中心) 【摘要】 目的 建立检测人免疫缺陷病毒1型(HIV．1)的多重巢式PCR(nPCR)和多重反转录PCR(RT—PCR)方法。将其与已 经上市的NASBA法试剂盒进行检测敏感性比较；探讨血浆RNA水平对PCR检测敏感性的影响；评价该方法用于我国HIV一1感 染者诊断的价值。方法 针对HIV一1的gag、pol和go41区设计3套引物，建立检测HIVDNA的多重nPCR和检测HIVRNA的 多重RT—PCR方法；分别以建立的PCR方法和NASBA法对 119例 HIV阳性患者进行检测，比较2者的检测敏感性；将患者分为 不同的病毒载量组，比较PCR方法在各组患者中的检测敏感性差异；使用建立的PCR方法对 l0例可疑急性感染者进行检测；扩 增HIV．1膜区c2．c3段，对 nPCR检测阳性的43例 DNA样本进行亚型鉴定。结果 多重 nPCR的检测敏感度为 97．5％(116／ 119)，多重RT．PCR的敏感度为78．2％(93／119)，2者的特异度均为 100％(50／50)，多重nPCR和多重RT—PCR的阳性预测值分 别为97．5％(116／119)和78．2％(93／119)，阴性预测值均为 100％(50／50)，准确性分别为98．2％ 和84．6％。经比较，多重 nPCR和多重RT．PCR的检测敏感度都高于NASBA法。在病毒载量 10copy／mL的患者，nPCR的检测敏感性高于RT—PCR，在 病毒载量在 (10～l0)copy／mL的患者及病毒载量≥10copy／mL的患者，2者的敏感性比较相近，均接近 100％；检测的lO例可 疑急性感染者中，有5例患者的nPCR和RT．PCR检测结果阳性，抗体在随访过程中阳转 ，证实为HIV急性感染者；检测的43例 DNA样本分属于B’亚型(37例)，AE亚型 (5例)和BC亚型 (1例)。结论 本课题组建立的PCR检测方法可以对我国主要流 行的B’、AE和Bc亚型病毒株得到很好的扩增效果；nPCR的检测敏感性受血浆RNA水平的影响相对较小，RT—PCR的检测敏感 性受血浆 RNA水平的影响相对较大；PCR方法可以用于HIV急性感染者的早期诊断。 【关键词】 人类免疫缺陷病毒；核酸检测；聚合酶链式反应；诊断 【中图分类号】 R466．6 Establishmentand ClinicalApplication ofa M ultipleNested Polymerase Chain ReactionforDiagnosisofHIV-1Infection DAILi—li，CHEN De—xi，SHIring，WEIFei—li，LIU Zhi—ying，ZHANG Hong—hai，WU Ya-song，LIANG Lian· chun，WU Hao，ZHANG Tong (DepartmentofInfectiousDisease，BeijingYouanHospital， A【BsTRAcT】 objective Toestablishamultiplenestedpolymerasechainreaction(nPCR)andRT—PcRdiagnosisassaysystemfor humanimmunodeficiencyvirus．1(HIV．1)andtocomparethesensitivity．specificityandotherfeaturesofthemethodwiththoseofa marketedassay．nucleicacidsequence．basedamplification(NASBA)．Methotis TheauthorsestbalishedannPCRofrdetectionofHIV DNAandRT-PCRf0r