实验名称氨基酸分离鉴定纸层析法成绩.doc

实验名称 氨基酸的分离鉴定—纸层析法 成 绩 日期 合作人 指导教师 【实验目的】 　1. 学习氨基酸纸层析法的基本原理。 2 . 掌握氨基酸纸层析的操作技术。 【实验原理】 纸层析法分离氨基酸是根据氨基酸的分配系数不同而进行分离的，鉴别氨基酸是根据氨基酸的比移值进行的。 【实验记录】 操作步骤 实验记录 （时间、现象、特征等） 备注 (解释、注意事项等) 1. 准备滤纸：在纸的下端距边缘2～3㎝处用铅笔划一条直线，分5个等距离点，作记号。 2. 点样：用毛细管将各氨基酸样品分别点在标记的位置上，重复2～3次。 3. 扩展：层析缸中加入30ml扩展剂，将缝成筒状的滤纸直立其中。待溶剂上升适当距离后取出滤纸，用铅笔描出溶剂前沿界线，吹干。 4. 显色：滤纸表面均匀喷上茚三酮溶液，用热风吹干或置烘箱中（100℃）烘烤5min。 5. 测量、计算：分别测量X、Y值，计算各氨基酸的Rf值。 6. 实验结束(时间)。 【实验结果】 【结果分析】 实验名称 凝胶过滤法使蛋白质脱盐 成 绩 日期 合作人 指导教师 【实验目的】 学习凝胶过滤法分离纯化物质的原理与操作技术。 【实验原理】 凝胶具有网孔结构，小分子物质能进入其内部，大分子物质被排除在外部。当蛋白质的盐溶液通过凝胶过滤层析柱时，蛋白质首先被洗脱下来，而无机盐后被洗脱下来。 【实验记录】 操作步骤 实验记录 （时间、现象、特征等） 备注 (解释、注意事项等) 1. 溶胀凝胶。 2. 凝胶装柱：按实验教程要求安装层析装置，将溶胀好的SephadexG-25装入层析柱中。 3 .洗柱：接通洗脱液（水），按要求洗柱并调整好流速。 4. 加样洗脱：吸取1ml样品（蛋白质－硫酸铵溶液），小心地加到床面上，拧松螺旋夹，待样品全部进入凝胶柱中，接通洗脱液，开始洗脱并收集洗出液。 5 .搜集检查：每管收集1ml洗出液。取洗出液2滴加入白瓷板穴中，加入纳氏试剂1滴，如有铵盐洗脱下来，则有黄红色沉淀。取洗出液2滴置小试管中，加入磺柳酸1滴，如有蛋白质洗脱下来，则有白色混浊或沉淀出现。 检查结果记入下表 6.实验结束(时间)。 【实验结果】 管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 NH4+ Pr 管号 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 NH4+ Pr 管号 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 NH4+ Pr 【结果分析】 实验名称 乙酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白 成 绩 日期 合作人 指导教师 【实验目的】 　　学习乙酸纤维素薄膜电泳的原理，掌握有关操作技术。 【实验原理】 本实验以乙酸纤维素薄膜作为血清蛋白电泳的支持介质。血清蛋白分子的大小、形状以及在同一pH下所带电荷的差异将导致它们在电场中的移动速度不同，从而使得它们在膜上能够分离开，染色后呈现出电泳图谱。 【实验记录】 操作步骤 实验记录 （时间、现象、特征等） 备注 (解释、注意事项等) 1.鉴别薄膜的光滑面和非光滑面，并用铅笔作标记。 2.浸膜：将薄膜浸泡在缓冲液中（30分钟）。 3.从缓冲液中取出薄膜，用滤纸吸去表面的缓冲液。 4.点样：在距薄膜一端1.5cm处的无光泽面上，将血清涂在薄膜上。 5.搭膜：薄膜的点样面朝上，平贴在电泳槽支架上，点样端靠近阴极，两端覆以纱布做引桥。 6.电泳：电压100V，电流0.4～0.6mA/cm。 7.染色：将薄膜浸于氨基黑10B中染色。 8.漂洗：逐级漂洗，（5min×4次）待背景无色为止，最后用蒸馏水漂洗。 9.观察结果。 10.实验