NY 1665-2008 畜禽饮用水中总大肠菌群和大肠 埃希氏菌的测定 酶底物法.docVIP

中华人民共和国农业行业标准 NY/T 1665—2008 畜禽饮用水中总大肠菌群和大肠 埃希氏菌的测定 酶底物法 Determination of total coliforms and escherichia coli in drinking water for livestock and poultry-Enzyme substrate method 2008-07-14发布 2008-08-10实施前 言 本标准中附录A为规范性附录。 本标准由全国畜牧业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：农业部食品质量监督检验测试中心(上海)。 畜禽饮用水中总大肠菌群和大肠 埃希氏菌的测定 酶底物法 本标准规定了畜禽饮用水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌的酶底物法测定方法。 本标准适用于畜禽饮用水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌的最可能数(MPN)值的快速测定。 本方法可同时检测畜禽饮用水中的总大肠菌群和大肠埃希氏菌。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 (不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准然而鼓励根据本标准达成协议的各方研究 GB／T 6682分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 在选择性培养基上总大肠菌群产生的特异性生物酶 β半乳糖苷酶( βD-galactosidase)，将无色的底物水解为黄色的邻硝基酚(ONP)，依此测定畜禽饮用水中总大肠菌群最可能数(MPN)值。 在选择性培养基上大肠埃希氏菌产生的特异性生物酶 β半乳糖苷酶( βD-galactosidase)，使无色的培养基呈现黄色，同时产生的β葡萄糖醛酸酶( β glucuronidase)分解4甲基伞形酮β -D -葡萄糖醛酸苷(MUG)，使4甲基伞形酮游离并产生荧光物质，在波长366 nm紫外光下产生特征性蓝色荧光，依此测定畜禽饮用水中大肠埃希氏菌最可能数(MPN)值。 4 培养基及试剂 除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂；实验用水应符合GB／T 6682中三级水的规 4．1培养基 Minimal Medium ONPG MUG(MMO -MUG)培养基①，称取以下试剂： 硫酸铵[(NH4)2SO4] 5.0 g 硫酸锰(MnSO4) 0.5 mg 硫酸锌(ZnSO4) 0.5 mg 硫酸镁(MgS4) 100.0 mg 氯化}N(NaCl) 10.0 g 氯化钙(CaCl2) 50.0 mg 亚硫酸钠(Na2SO3) 40.0 mg 两性霉素B(amphotericin B) 1.0 mg 邻硝基苯β-D-吡喃半乳糖苷(ONPG) 500.0 mg ①可选用Colilert或同类市售商品。 4甲基伞形酮β -D- 葡萄糖醛酸苷(MUG) 75.0 mg 茄属植物萃取物(solanum萃取物) 500.0 mg N -2 -羟乙基哌嗪N -2 -乙磺酸钠盐(HEPES钠盐) 53 g N -2 -羟乙基哌嗪N -2 -乙磺酸(HEPES) 6.9 g 培养基经过121、5 in灭菌后，适用于1 000 mL水样的测定。 4．2灭菌生理盐水 称取85 g氯化钠(NaCl)，用适量蒸馏水溶解稀释至1 000 mL，混匀后取90 mL分装到稀释瓶内， 121℃、20 in高压灭菌。 5 仪器和设备 5．1培养箱：36℃1℃。 5．2高压蒸汽灭菌锅。 5．3烘箱。 5．4定量盘：定量培养用无菌塑料盘，含51个孔穴，每穴可容纳2 mL水样。 5．5程控定量封口机。 5．6紫外灯：波长366 nm。 5．7天平：感量001 g。 6 检验步骤 6．1试样制备 检测所需水样为100 mL。必要时，可对水样进行10倍稀释，取10 mL水样，加入到90 mL灭菌生 理盐水(4．2)中，混匀。 6．