实验一可溶性糖含量的测定——蒽酮法.docVIP

实验一 还原糖和总糖含量的测定 原理 3，5-二硝基水杨酸溶液与还原糖溶液共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范实验围内还原糖的量和棕红色物质颜色深浅的程度成一定比例关系，可用比色测定。操作简便，快速，杂质干扰较少。 实验方法 一 葡萄糖标准曲线的制定 葡萄糖标准曲线的制定：准确称取100mg分析纯的无水葡萄糖（预先在105℃干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后，定量转移至100mL容量瓶中，再定容至刻度，摇匀。浓度为1mg/Ml。 取9支25mm×250mm的试管，分别按下表加入试剂：（ml） 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 G的量 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 H2O 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 3，5-二硝基水杨酸 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 将各管溶液混合均匀,在沸水浴中加热5分钟,取出后立即用冷水冷却到室温,再向每管加入21.5mL蒸馏水,摇匀。于520nm波长处测A值。以葡萄糖mg数为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。 二 样品中总糖和还原糖含量的测定 以测定山芋中总糖和还原糖含量为例。 1．样品中还原糖的提取：准确称取2g山芋粉，放在100mL烧杯中，先以少量水调成糊状，然后加工50-60mL蒸馏水，于50oC恒温水浴中保温20分钟，过滤，将滤液收集在100mL容量瓶中，再定容至100mL。 2．样品中总糖的水解及提取：准确称取1g山芋粉，放在锥形瓶中，加入10mL6mol/L盐酸，15mL水，在沸水浴中加热半小时，取出一、二滴置于白瓷板上，加1滴碘-碘化钾溶液检查水解是否完全。如已水解完全，则不呈蓝色。冷却后加1滴酚酞指示剂，以10%氢氧化钠溶液中和至溶液呈微红色，过滤并定容到100mL。再精确吸取上述溶液10mL于100mL容量瓶中，定容到刻度，混匀备用。 3．样品中糖含量的测定：取7支队5mm×250mm试管分别按下表加入试剂： 项目 空白 还原糖 总糖 0 1 2 3 4 5 6 样液ml H2Oml 3，5-二硝基水杨酸 0 2 1.5 1.0 1.0 1.5 1.0 1.0 1.5 1.0 1.0 1.5 1.0 1.0 1.5 1.0 1.0 1.5 1.0 1.0 1.5 加完试剂后，其余操作均与制作标准曲线时相同。测定后，取样品的A平均值在标准曲线上查出相应的糖量。用下式计算出山竽粉中还原糖与总糖的百分含量。 数据处理推荐同学们用origin软件处理！ 最小二乘法求标准曲线方程的公式： X：G的浓度（μg／mL）Y：吸光度A＝－㏒T 本实验要求相关系数r≥0.99 1