牛传染性鼻气管炎病毒gB蛋白的分段表达与间接ELISA诊断方法的建立及应用.pdf

摘 要 bovine 牛传染性鼻气管炎(Infectious bv{ne热{no铂$酶难svin媾、器R1镪Sl起的孛瓣一静惫性、热姓、接齄靛转染病。痣毒基霸缀编玛11 种糖蛋白，其中gB蛋白悬病毒的囊膜表面展示的主鬻蛋白乏一，也是t要的免疫原蛋白。本试验根 据GenBank公张的IBRv基因序列，以IBRv 因，产物经琼脂糖凝胶电泳分祈，分别可见约1776 bp(命名为gBl)和155lbp(命名为gBII)的 接转纯，褥到誊8基因静宪整克潼薯—gB。 用生物学软件DwAstar分析gB蛋白氨基酸序列，对抗原性高、水溶性强和表面展示概率高的3 个嚣壤芳筹g螽褒先gB嚣，A斌瓣一轴啦礴；98e，矗恕岛描毛镪鹌2；98D，Al瓠鲥一￡e珏5#8)遘牙了蒙棱表达。 设计三对引物以构建的重组质粒为模板扩增3个目的区域，如前所述方法得到T-gBB、T．gBc和 T．gBD，盈m硪靼强H硪11分别双瓣切，回收目的片段，定向竟隆到圊撵处理的pET32a表达载体。 mmol，LlP∞G rpET32a．gBD。将三个阳性重组质粒分别转入表达宿主菌BL口l(DE3)中，经终浓度为O．6 溶形式表达，重组蛋白大小与预期相符，分别为29．2KD，3l2KD和32．4KD，表达效率分别为40，9％． 与牛传染性鼻气管炎阳性斑溥样赫发生爱盛，与孛转染性彝气管炎鹾性盘清无馕俺反应，缝诧的载 有交叉爱应，显示表达獭自具有藏好的抗滕性和特辨性。 丰巴寝达的r32a-gBB重组蛋白经初步纯化后用作包被抗原，建立了检测IBRv血清抗体的间接 ELlsA方法，势确定了最逶抗骧镪被滚痘(∞潮蕊瞄、最逶巍清稀释瘦({：40)、纛清最适俸臻对阕@0 翔蛙阉(120min)、宸物蕺逶显色瓣闼母ml玛霹判定赛毽(0t395)。包装躲重缀撬原不与上述六中牛 疫病阳性血清发生交叉反应，表明建立的BLlsA诊断方法具脊良好的特异性。批内重复试验和批问 重复试验变异系数均小予lO％，谈明该方法具有缀好的重复·瞧。该诊瞬方法与中和试验耀比较。特 剂盒比较，特异性、敏感性和符台率分别为92％、92．7％和92，5％。戍崩该诊断方法检测保存的我闲 部分地隧牛盘溥样品，阳往军为71．8i％。±述鳍采袭明该诊馘方法曩有良好静特异性和敏感性，攥 示了良好的应用前景。 本磷究残磅克隆了l转RV98羹阉，对麓中静三个区域逡盼了表这，获得y璐霹溶毪表达的謦鹃 蛋自，为研究gB基因的功能奠定了良好的基础。利用表达的32a-妒B蛋白成功建立了快速简便的 ELlsA诊断方法，为开发商品化试蠢《鑫、lBR的流{子病学调囊及其控制酒灭提供了坚强躲接术支持。 关键词 牛传染性鼻气管炎病毒，gB蛋白，克隆，表达，间接ELIsA，诊断 Abs专r臻e重 is dise粘e ofea犍le， ln曳ct}ousb蝌lne虫ino扛墨c沁谴i《l瑚qa鞋acu艳，fcver{sha聪conl89lo璐infectious rhinotrachenis encodes caIlsedbvinfe嘶ousbovine genome eleven醇ycoproteins． vinls(IBRV)．Vlrus Is onthe ofVinls．Itisthe B oneof maj娜 m面orp∞teinspreSentedenVelope Amongthem酉ycoprotein