hBDNF基因修饰骨髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响.pdfVIP

中华创伤杂志2012年 4月第28卷第4期 ChinJTrauma，April2012，Vo1．28，No．4 · 375 · · 基 础 研 究 · hBDNF基因修饰骨髓间充质干细胞移植 对大 鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响 刘凯 刘文革 王振宇 姚志鹏 摘【要】 目的 探讨人脑源性神经营养因子(humanbrain—derivedneurotrophicfactor，hBDNF) 基因修饰骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells，MSCs)移植入大鼠体内后在脊髓损伤区的存活 情况、hBDNF蛋白的表达情况及其对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响。 方法 240只成年雄 性sD大鼠按随机数字表法分为假手术组、损伤组、hBDNF一大鼠MSCs(rMSCs)组和空载体一rMSCs 组，每组60只。用Allen法建立大鼠脊髓损伤模型。造模后7d，于L4 间隙蛛网膜下腔向hBDNF— rMSCs组、空载体一rMSCs组和损伤组分别注射等体积的hBDNF基因修饰 rMSCs悬液、空载体基因 修饰rMSCs悬液和PBS。移植后 1，2，3，7和 14d分别取损伤脊髓组织，用荧光显微镜观察带有增强 型绿色荧光蛋白(enhnacedgreenfluorescentprotein，EGFP)基因的rMSCs在体内的存活分布情况，用 Westernblot法检~JIhBDNF蛋白的表达水平，以原位末端标记法 (TUNEL)检测神经细胞的凋亡情况。 结果 hBDNF—rMSCs组和空载体 一rMSCs组均检测到EGFP基因表达的绿色荧光信号；hBDNF— rMSCs组表达 hBDNF蛋白，其表达水平随时间而变化，移植后2d即可检测到hBDNF蛋白表达，移 植后7dhBDNF表达量最高，此后逐渐下降；移植后2，3，7和 14d，hBDNF—rMSC组 TUNEL阳性细 胞数量最少，空载体一rMSCs组次之，损伤组相对较多，差异有统计学意义(P0．05)。 结论 脊 髓损伤后hBDNF基因修饰rMSCs经蛛网膜下腔移植能聚集生长在脊髓损伤区域，并表达hBDNF蛋 白；hBDNF基因修饰rMSCs能够抑制神经细胞的凋亡。 【关键词】 脊髓损伤；脑源性神经营养因子；骨髓间充质干细胞；基因治疗；凋亡 Apoptosisofneuralcellsin responsetohBDNF-modifiedrM SCstransplantation afterspinalcord injuryinrats UKai ， U耽 —ge，WANGZhen—yu，YAOZhi-peng． UnionClinicalMedical School，FujianMedicalUniversity，Fuzhou350001，China Co~espondingauthor： U 耽 n—ge，Email：wenge1999@ yahoo．corn．ca 【Abstract】 Objecfive Todiscussthesurvivorshipofratmesenchymalstemcells(rMscs)and theexpressionofhumanbrain．derivedneurotrophicfactor(hBNDF)proteinaftertrnasplantationofthe hBDNF—modifiedrMSCs(hBDNF—rMSCs)totheadultratswithspinalcordinjury(SCI)anddiscussthe effectofhBDNF—rMSCsontheapoptosisofratneuralcells． M ethods A totalof240aduhmaleSpra— gue—Dawleyratswererandomlydividedintosham operationgroup，SCIgroup，hBDNF—rMSCstransplanta- tionrgoupandemptyvector—rMSCstrnasplantationrgoup．with60ratsineachgroup．rheSCImodelwas establishedbyusingthemodifiedAllentechnique．Atday7aftermode