去甲斑蝥素对高糖刺激的HK-2细胞FN，ColIV和TGF-β1mRNA及蛋白表达的影响.pdfVIP

278 ， 2012,37(3) p：／／www．csumea．ors； ／／xbrx一· -net 去甲斑蝥素对高糖刺激的HK．2细胞 FN，ColIV和TGF—1mRNA及蛋白表达的影响 陈琼 一，李瑛 ，罗俊辉 ，杨阳 ，李军 ，孙林 ，肖力 ，许向青 ，彭佑铭 ，刘伏友 (1．中南大学湘雅二医院肾内科 ，中南大学肾脏病研究所，长沙410011； 2．同济大学附属第十人民医院肾内科，上海200072) 【摘要 1目的：观察去甲斑蝥素 (NCTD)对高糖刺激的HK．2细胞外基质和TGF—pl表达的影响。方法：常规 培养HK．2细胞 ，无血清 DMEM培养基 同步培养 24h，细胞分为正常葡萄糖组 (C，D—glucOSe5．5mmol／L)、甘 露醇对照组 (M，5．5mmol／LD—glucose+24．5mmol／Lmannito1)、高糖组 (HG，30mmol／LD—glucose)、高糖 +NCTD干 预组 f30mmol／LDglucose+0．5～40mg／LNCTD)。台盼蓝排斥实验检测 NCTD对高糖刺激的细胞毒性。MTT法 检测 NCTD对高糖刺激的细胞增殖的影响。收集培养 6，24，48h后细胞总RNA及蛋 白，用RT-PCR检测细 胞 FN，Col1V和 TGF—p1mRNA的表达 ，采用Western印迹检测FN，ColVI和TGF—p1蛋 白的表达 。结果 ：不 同浓度NCTD作用72h后 ，浓度超过5mg／L的NCTD对高糖环境下的HK一2细胞有明显的毒性。RT-PCR和 Western印迹结果显示 ：30mmol／LD一葡萄糖可引起HK．2细胞FN，Col1V和 TGF．1mRNA及蛋 白水平的升高 (P0．05)，而 5mg／LNCTD可抑制高糖刺激的FN，ColVI和 TGF．p1的表达 (P0．05)。相 同渗透浓度的D．甘露 醇组对上述指标均无影响 (P0．05)。结论 ：NCTD能下调 HK．2细胞 FN，ColVI及 TGF．p1的表达 。 [关键词 】去甲斑蝥素；纤粘连蛋白；胶原1V；转化生长因子一p1 DOh10．3969／j．issn．1672—7347．2012．03．012 EffectQiInorcanthaHdinorltheexpressiond FN。ColIVand TGF-plm附 nad ninHK-2cellsinducedbyhighglucose CHENOdong2,LIYing，LUOJunhui，YANGYang，uJun，SUNLin， XIAOLi，XUXiangqing，PENGYouming，LIUFuyou DepartmentofNephrology,SecondXiangyaHospital,InstituteofNephrologyjCentralSouthUniversity,Changsha410011， 2．DepartmentofNephrology,To iUniversityAffiliatedTenthPeoplesHospital,Shanghai20007~China) Objective：Toobservetheeffectofnorcantharidin(NCTD)ontheexpressionofmRNAandprotein offibronectin(FN)，collagenIV(ColIV)andtransforminggrowthfactor—Ol(TGF—B1)inhumankidney proximaltubularepithelial(HK)一2cellsinducedbyhigh~ucose． Methods：HK-2cellswereincu