去甲斑蝥素对人脐静脉内皮细胞迁移、黏附、管腔形成能力及血管内皮生长因子受体、内皮细胞钙黏着蛋白表达的影响.pdfVIP

中国癌症杂志 2012年第22卷第3期 232 CHINA ONCOLOGY 2012Vo1．22No．3 去甲斑蝥素对人脐静脉 内皮细胞迁移、黏附、 管腔形成能力及血管内皮生长因子受体、内皮 细胞钙黏着蛋白表达的影响 余涛 刘曼曼 李丹 刘见荣 余清清 侯风刚 李琦。 1．上海中医药大学附属市中医医院肿瘤科 ，上海 200071； 2．上海交通大学附属第六人民医院药剂科 ，上海 200233； 3．上海中医药大学附属普陀医院实验中心，上海 200062 [关键词 ] 去甲斑蝥素；人脐静脉内皮细胞；细胞迁移；细胞黏附；管腔形成；血管生长因子受体；内 皮细胞钙黏蛋白 DOI：10．3969／j．issn．1007—3969．2012．03．014 中图分类号：R730．231 文献标志码：A 文章编号2012)03—0232—04 去甲斑蝥素(norcantharidin，NCTD)作为我国自行研发 购 自杭州至贤生物科技有限公司；RIPA细胞裂解液购 自日 的抗癌药物已在临床应用多年 ，其抗癌活性强，不良反应 本Takara公司；PVDF膜购 自美国Millipore公司；电泳仪、 小，靶点多。肿瘤生长和转移依赖于肿瘤血管生成，肿瘤 半干法转膜仪和凝胶成像系统均为Bio—Rad产品；蛋白印迹 血管的生成是一个多因素参与的复杂过程 ，促血管生成因 法所需的其他试剂耗材均购 自碧云天生物技术研究所。 子的释放和活化在该过程中起重要作用。血管内皮生长因 1．2 细胞培养 子 vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)必须通过血管内 HUVECs常规复苏后 ，以完全培养液(含 10％胎牛血 皮生长因子受体vascularendothelialgrowthfactorreceptor， 清，100kU／L青霉素和100m I_链霉素的DMEM培养液1培养 VEGFR)才能向胞内传导信号，使内皮细胞发生迁移 、黏附 于含37℃、CO：体积分数为5％及饱和湿度的培养箱中，适 及管状形成等生物行为 ，继而形成血管。内皮细胞钙黏着 时换液、传代 ，连续培养。按NCTD给药浓度不同，实验分 蛋白fVE—cadherin)是维持内皮细胞之间的连接和信号传导 为0(对照组)、5和10 mol／L，共3组。 的重要分子 ，也是血管形成必不可少的蛋 白。已有研究发 1．3 划痕实验 现，NCTD具有抗血管的作用 … 。本研究 旨在观察NCTD 参照Ekstrom等 的方法 ，预先在24孔板中铺鼠尾 I 对血管内皮细胞的影响，以人脐静脉内皮细胞株 (human 型胶原 ，每孔150 L，经5和10 mol／L的NCTD处理24h umbilicalveinendothelialcells，HUVECs)为对象 ，研究 的HUVECs分别以5×10个 ／mL的密度接种于24孔板 ，嚣培 NCTD对HUVECs迁移 、黏附、管腔形成及其VEGFR、vE— 养箱中培养至形成单细胞层时 ，用黄色移液器吸头在板 cadherin表达的影响，探讨NCTD抗肿瘤血管的可能机制。 底划 “一”字痕 ，镜下拍照；继续培养24h再次拍照，用 1 材料和方法 IMAGE软件计算划痕距离，并计算细胞迁移率(％)=(1一培养 1．1 材料 后的划痕距离，初始距离1X100％。 NCTD购 自上海融禾 医药科技发展有 限公司(纯度 1．4 黏附实验 99％1；HUVECs由上海中医药大学附属普陀医院实验 中 按参考文献 [3]的方法 ，先在