人脐带间充质干细胞源性心肌细胞的纯化及生物学特性鉴定.pdfVIP

笪 虫国堡』 志2013年8月第8卷第4期 · 277 · · 论 著 · DOI：10．3969／j．issn．1673~501．2013．04．008 人脐带间充质干细胞源性心肌细胞的纯化及生物学特性鉴定 汪 涛 林晓波 吴 毅 陈晓东 马桂霞 贺谷雨 ， 蔡志伟 刘必刚 秦 山 马 廉 ， 摘要 目的 探讨基因修饰的方法纯化人脐带问充质干细胞源性心肌细胞的可行性， 为临床心肌细胞移植寻找新的 干细胞来源。方法 将人心肌球蛋白轻链 (MLC一2v)基因启动子与嘌呤霉素抗性基 因融合，然后转染人脐带问充质干细 胞，通过嘌呤霉素筛选 ，纯化培养出MLC一2v阳性细胞 ，用5一氮杂胞苷进行诱导，检测诱导后 MLC-2v阳性细胞是否表达心 脏相关标记物。结果 纯化培养出的MLC一2v阳性细胞经5一氮杂胞苷诱导后表达心肌细胞的标记物肌钙蛋白I(troponi I)、MLC一2v和结蛋白(desmin)。RT—PeR检测证实，人脐带间充质干细胞在转染及诱导前不表达 Nkx2．5和desmin，经筛 选诱导后细胞表达Nkx2．5和desmin。结论 人脐带问充质干细胞通过基因修饰方法可以得到相对纯化的心肌样细胞 ，可 能成为心脏细胞移植治疗重要的细胞来源。 关键词 脐带问充质干细胞； 心肌细胞 ； 基因修饰 Purification and identification ofbiologicalcharacteristics human umbilicalcordmesenchymalstem cells WANG Tao一，LINXiao—bo ， UYi，CHENXiao—dong ，MA Gui—xia ，HE Gu—yu。 CAIZhi—wei，，J， Bi—gang。 Qm Shan。， ， ， MALian (JCardiovascularSu~euofShenzhenPeopleHospital，Shenzhen518020：2ResearchCenterforTranslationalMedicine ofShantouUniversityMedicalCollege，Shantou515063；3DepartmentofPaediatricsoftheSecondAffiliatedHospitalofShantou UniversityMedicalCollege，Shantou515041；4MolecularPathologyLaboratoryofShantouUniversityMedicalCollege，Shantou 515063，China) COrrespondingAuthor：MA Lian，E—mail：pmalian8965@ sina．con AbstractObjectiveToinvestigatethefeasibilityofpurificationofhumanumbilicalcordmesenchymalstem cell—derived cardiomyocytesbygeneticmodification．asanewsourceofstem cellsforclinicalmyocardialcelltransplantation．MethodsFirstof all，thehumancardiacmyosinlightchain (MLC一2v)genepromoterandpuromycinresistancegenewerefusedbygenetic modification，andthenthehumanumbilicalcordmesenchymalstem cellsweretransfected．Secondly，theMLC一2V—positivecells werepurifiedbypuromycinandthenthecellswerecultured．Afterthat，theMLC一2v—positivecellswereinducedby5-azacy