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过氧化物酶动力学性质分析 一、实验目的： 本实验通过对过氧化物酶酶反应进程曲线的制作，学会测定酶反应初速度的方法 考察反应体系的pH对酶反应速度的影响以及热处理对酶活性的影响 使学生掌握酶动力学性质分析的一般方法。 二、实验原理 过氧化物酶(Peroxidase ，简称POD)存在于多种果蔬中，并具有很高得热稳定性。在果蔬加工的热处理时常作为热处理是否充分的指标。 过氧化物酶可催化过氧化氢的分解，反应如下： POD H2O2 ＋ AH2 A ＋ 2H2O AH2是无色的还原性化合物，被氧化后转变成有色化合物A。若AH2为邻苯二胺，被氧化后的产物在430nm的波长下有最大吸收，利用分光光度法可测定反应体系随反应的进行吸光度的变化，从而监测反应进程和测得酶反应初速度。 三、实验材料和仪器 试剂： 1、0.05mol/L，pH7.0，含1.0mol/LNaCl的磷酸盐缓冲液（缓冲液Ⅰ） 2、分别配制0.1mol/L，pH6.0、pH7.0、pH8.0磷酸盐缓冲液（缓冲液Ⅱ） 3、1％邻苯二胺～乙醇溶液 4、0.3％过氧化氢溶液 5、过氧化物酶的提取：125g卷心菜加125ml缓冲液Ⅰ用，离心去残渣，所得上清液即为粗酶液，使用时根据活力进行稀释。 四、实验步骤 1、酶活力的测定－－连续监测法 该方法每隔一定时间（10s～60s）测定一次产物的变化量，连续测定多点，然后将测定结果对时间作图，绘制反应进程曲线，求出酶反应速度。 2、测定pH对酶活力的影响 依次采用不同pH（6.0、7.0、8.0）的磷酸盐缓冲液，按上述方法进行酶活力的测定。以考察pH对酶反应速度的影响。 3、热处理对酶活力的影响 取三支小试管，分别装入3ml的粗酶液并置于85℃的水浴中加热1、3、8分钟，加热结束后将试管置于冰浴中待测酶活力。 五、实验数据处理 以吸光值（A）为纵坐标，反应时间（t）为横坐标分别作出不同反应体系pH和不同热处理时间的酶反应吸光值A～反应时间t（秒）的曲线，由曲线中反应最初阶段的线性部分计算出斜率，该斜率即为过氧化物酶在该反应条件下酶反应的初速度。 过氧化物酶的活力可定义为每分钟增加0.1吸光值为一个酶活力单位。 * * 主要仪器设备： 组织捣碎机匀浆、离心机、分光光度计