用人血清白蛋白功能化的磁性纳米粒子对黄连的配体垂钓研究.pdfVIP

中国化学会第十六届有机分析与生物分析学术研讨会论文集 用人血清白蛋白功能化的磁性纳米粒子对黄连的配体垂钓研究 青琳森，薛莹，熊静，丁立生，廖循 中国科学院成都生物研究所，成都 610041 liaoxun@cib.ac.cn 摘 要：黄连以清热除湿、泻火解毒之功效广泛应用于中医处方之中。本实验利用 人血清白蛋白功能化的磁性纳米粒子对黄连提取液进行配体垂钓，并利用电喷雾质 谱对垂钓出的各化合物进行了鉴定。本研究为药用植物中活性小分子的方便快捷识 别与分离提供了一个新的思路。 关键词：磁性纳米；配体垂钓；黄连；人血清白蛋白 中图分类号：O 657.63 在生物分析中，磁性纳米粒子（Magnetic 直接从黄连提取物中捕获能与 HSA 发生相互 nanoparticles, MNPs ）因其超大的表面积、悬浮 作用的小分子活性成分，然后配合现代分析技 稳定性好、易于修饰、偶联容量高、具有超顺 术对其进行定性分析。本方法结合生物信息和 磁性易于固液相分离等特性受到越来越多的关 化学结构信息，可为中药活性化学成分分析提 注。基于分子间相互作用原理发展起来的配体 供一种新的思路。 垂钓（Ligand fishing ）方法，则在识别能够相 互作用的分子方面显示出得天独厚的优势。配 1 实验部分 体垂钓方法与有机分析手段的结合，为研究生 1.1 仪器和测试条件 物大分子和活性小分子之间的相互作用开辟了 高效液相色谱仪为 TPS 公司 Spectra [1, 2] ® 一条很好的途径 。目前，国内外已经有不少 System 液相色谱仪（包括SCM 1000 真空脱气 将磁性纳米粒子用于配体垂钓的文献报道，但 机、ASM 3000 自动进样器、P 4000 四源梯度 [3-5] 是绝大多数是针对生物分子配体 。我们将其 泵、UV 6000 LP 二极管阵列检测器），质谱为 [6-8] DECA 用于“垂钓”中药小分子活性成分的研究 ，发 ThermoQuest Finnigan LCQ 电喷雾离子阱 现其可以特异性地吸附复杂混合物体系中的活 质谱。 性成分，且操作十分方便。HSA 由于具有不同 色谱条件：色谱柱为Agilent Zorbax (5µm, [9] 类型化合物的结合位点 ，因此它不但在转运 4.6×250 mm) ；流动相为乙腈-水（50 ∶50 ），其 与存储内源及外源配体方面发挥了巨大的生理 中加入50 mmol·L-1 磷酸二氢钾，25 mmol·L-1 作用，而且还常常作为模式蛋白来研究细胞间 十二烷基磺酸钠，调节pH 3 ；柱温30 ℃；流 相互作用，以及药物与蛋白相互作用后的药理 速0.6 mL·min-1；200 ~ 600 nm 全波长检测；质 [10] 学行为 。尤其是在X-衍射确定其三维结构后 谱参数：正离子模式检测，雾化壳气为氮气35 [11]，围绕HSA 的研究工作更是生物医学领域 uit ，雾化辅助气为80 uit，毛细管温度250 ℃， 的一大热点。鉴于作为配体的药物与 HSA