仪器及分析第8讲 高效液相色谱法.ppt

第八讲 高效液相色谱法 一、概述 它是在经典液相色谱基础上，引入了气相色谱的理论，在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，因而具备速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化的特点． 为了更好地了解高效液相色谱法优越性，现从两方面进行比较： 1．高效液相色谱法与经典液相色谱法 高效液相色谱法的最大优点在于高速、高效、高灵敏度、高自动化． 为了获得高柱效而使用了粒度很小的固定相（10μm），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。 2．高效液相色谱法与气相色谱法 （l）气相色谱法分析对象只限于分析气体和沸点较低的化合物，它们仅占有机物总数的20％．对于占有机物总数近80％的那些高沸点、热稳定性差、摩尔质量大的物质，目前主要采用高效液相色谱法进行分离和分析． (2)气相色谱采用流动相是惰性气体，它对组分没有相互作用力，仅起运载作用． 高效液相色谱法中流动相可选用不同极性的液体，选择余地大，它对组分可产生一定亲和力，并参与固定相对组分作用的选择竞争。因此，流动相对分离起很大作用，相当于增加了一个控制和改进分离条件的参数，这为选择最佳分离条件提供了极大方便． 　(3)气相色谱一般都在较高温度下进行的，而高效液相色谱法则经常可在室温条件下工作． 总之，高效液相色谱法是吸取了气相色谱与经典液相色谱优点，并用现代化手段加以改进，因此得到迅猛的发展． 液相色谱仪器 high performance liquid chromatograph 液相色谱仪（2） 液相色谱仪（3） 液相色谱仪（4） 二、高效液相色谱仪 高效液相色谱仪的结构示意见下图，一般可分为4个主要部分：高压输液系统，进样系统，分离系统和检测系统．此外还配有辅助装置：如梯度淋洗，自动进样及数据处理等． 1．高压输液系统 由于高效液相色谱所用固定相颗粒极细，因此对流动相阻力很大，为使流动相较快流动，必须配备有高压输液系统． 它是高效液相色谱仪最重要的部件，一般由储液罐、高压输液泵、过滤器、压力脉动阻力器等组成， 高压输液泵是核心部件． 常用的输液泵为机械往复式恒流泵． 2．进样系统 高效液相色谱柱比气相色谱柱短得多（约5～30cm），所以柱外展宽（又称柱外效应）较突出． 柱外展宽是指色谱柱外的因素所引起的峰展宽． 进样系统是引起柱前展宽的主要因素，因此高效液相色谱法中对进样技术要求较严． 进样方式：注射器 旋转式六通阀　 旋转式六通阀 3 分离系统——色谱柱 色谱柱是液相色谱仪的心脏部件，它包括柱管与固定相两部分． 柱管材料有玻璃、不锈钢、铝、铜及内衬光滑的聚合材料的其他金属．玻璃管耐压有限，故金属管用得较多． 4．检测系统 在液相色谱中，有两种基本类型的检测器． 一类是溶质性检测器，它仅对被分离组分的物理或化学特性有响应，属于这类检测器的有紫外、荧光、电化学检测器等． 另一类是总体检测器，它对试样和洗脱液总的物理或化学性质有响应，属于这类检测器的有示差折光，电导检测器等． (1) 紫外－可见检测器 （2）荧光检测器（fluorescence detector） (3).示差折光检测器（differential refractive index detector） (4).电导检测器 其作用原理是根据物质在某些介质中电离后所产生电导变化来测定电离物质含量。 三、高效液相色谱的固定相和流动相 （－）固定相 高效液相色谱固定相以承受高压能力来分类，可分为刚性固体和硬胶两大类． 刚性固体以二氧化硅为基质，可承受7.O×108～1.O×109Pa的高压，可制成直径、形状、孔隙度不同的颗粒． （二）流动相 在气相色谱中，载气是惰性的，常用的只有三四种，他们的性质差异也不大，所以要提高柱子的选择性，只要选择合适的固定相即可。 但在液相色谱中，当固定相选定后，流动相的种类、配比能显著的影响分离效果，因此，流动相的选择也非常重要。 液相色谱的流动相又称为：淋洗液，洗脱剂。 选择流动相时应注意的几个问题 选择流动相时应注意的几个问题 1、 液-液分配色谱liquid- liquid partition chromatography 2、 液-固吸附色谱liquid-solid adsorption chromatography 3、 离子交换色谱ion-exchange chromatography 4、 离子色谱 i