银杏复方制剂对脾虚小鼠消化酶活性的影响的研究.docVIP

银杏复方制剂对脾虚小鼠消化酶活性的影响研究 龙岩学院生命科学学院06级动物医学班 王千金 摘要：采用日龄一致，体重大致相近的KM种雌性小鼠为试验材料，研究银杏复方制剂对脾虚小鼠小肠消化酶活性的影响。结果表明：银杏复方制剂显著提高了脾虚小鼠学小肠消化酶的活性，说明对脾虚小鼠的脾虚有明显的改善。 关键词：银杏叶；复方制剂；脾虚；消化酶 银杏树（Ginkgo biloba）是世界上残存的最古老的植物之一[1]。银杏别名公孙树,系银杏科银杏属落叶乔木,是中国的特种植物, 70%的银杏资源产于中国。银杏的药用价值主要是在其叶和果实，银杏叶被用作药物已有500余年的历史，早在宋朝就使用银杏叶治疗哮喘和支气管炎。银杏叶甘苦涩，平，入肺，脾，胃三经。功效为敛肺止咳，化湿止泻，主要用于治疗治胸闷心痛，心悸怔忡，痰喘咳嗽，泻痢，白带。而其叶的提取物已经广泛运用于医学和其他的相关领域，但是以银杏叶为主要原料的复方制剂用于治疗脾虚小鼠还是少有报道。本实验中银杏复方制剂是以银杏叶为主要原料配合黄芩、白术、党参等中草药研制而成。黄芩为唇形科植物,黄芩( scutellaria baicalensis georgi)的干燥根,味苦,性寒,具有清热燥湿、泻火解毒、止血安胎的功效[2]。主要用于治疗湿温，黄疸，泻痢，热痢，高热烦渴，肺热咳嗽，胎热不安。白术，甘、苦、温，归脾、胃经。具有补气健脾，燥湿利水，固表止汗，安胎功能等功效。主治泄泻、痰饮、水肿、黄疸、湿痹、头晕、自汗、小便不利、胎气不安等症[3]。党参具有补中益气，健脾益肺的功效。用于脾肺虚弱，气短心悸，食少便溏，虚喘咳嗽，内热消渴等。《本草从新》记载：“补中益气、和脾胃、除烦渴。中气微弱，用以调补，甚为平妥。茯苓性味甘淡平，入心、肺、脾经。具有渗湿利水、健脾宁心之功效。临床上常用于治疗水肿尿少、痰饮眩晕、脾虚食少、便溏泄泻、心神不安、惊悸失眠等症[4]。茯苓之利水，是通过健运脾肺功能而达到的。本文利用银杏复方剂对脾虚小鼠的治疗，采用消化酶试剂盒对小鼠的肠道消化酶的测量，为进一步开发和利用银杏复方剂为科学提供科学的实验和理论依据。 1 材料与方法 1.1 试验材料 1.1.1银杏叶干粉由长沙博健生物科技有限公司提供，产品标准号：Q/ADPG001-2008；黄芪、党参、白术、茯苓购于福建紫金医药连锁有限公司，质量符合中华人民共和国兽药典（2005版）标准。 1.1.2利血平注射液（1mg/mL），广东邦民制药有限公司生产，产品批号080307。 1.1.3 实验动物 6周龄KM种小鼠，雌性，体质量23～28g，购于福建医科大学实验动物中心。 1.1.4 淀粉酶、碱性磷酸酶、脂肪酶、胰蛋白酶、考马斯亮兰测定试剂盒均购自南京建成生物科技有限公司 1.1.5仪器 离心机、水浴锅、漩涡混匀器、720型分光光度计。 2.试验方法 2.1银杏叶复方制备：将银杏叶干粉、黄芪、党参、白术、茯苓5种药物按照5:2:1:1:1的比例混匀，采用水煮醇提的方法，首先分别用8倍、6倍和5倍量水煎煮1h，混合煎煮液并浓缩至100 mL，再将煎煮液分别用75%和85%的乙醇混合过夜，并调节pH值到7.0左右，去除沉淀后用旋转蒸发仪浓缩，制得每mL含有1g生药的浓缩液。 2.2实验性脾虚证模型小鼠的建立 依据中医脾虚证诊断参考标准[5]，选择利血平造脾虚模型，使用剂量参考文献进行[6]。通过动物试验，以小鼠便溏、食欲减少、消瘦、呆立、群聚、活动明显减少等明显脾虚体征为脾虚证模型复制成功，确定小鼠脾虚证模型使用剂量为0.2mL /kg。 2.3 实验动物分组 KM种小鼠60只，雌性，随机分为对照组、脾虚模型组和银杏叶复方组。每组设5个重复，每个重复4只小鼠。对照组给予生理盐水，分别灌胃（0.3 mL /d）和腹腔注射（0.2mL /kg）；脾虚模型组给予生理盐水灌胃（0.3 mL /d）和腹腔注射利血平（0.2mL /kg），于第三天出现与文献报道相符的症状；银杏叶复方组分别给予银杏叶复方制剂（0.3 mL /d）灌胃和腹腔注射利血平（0.2mL /kg）。每天给药1次，连续14d。 2.4 样品制备 小鼠在结束造模后，禁食1夜，于次日上午从每个重复组取一只小鼠，断颈处死后分别取十二指肠、空肠、回肠，仔细剥离肠系膜和脂肪。用10 mL注射器（侧开口，保护肠壁）吸取4℃生理盐水冲洗肠腔，尽量将肠内容物冲洗干净。冲洗过的小肠平铺于滤纸上，纵向剖开肠段，暴露粘膜面，再用4℃生理盐水冲洗一遍。试验中做淀粉酶、碱性磷酸酶、脂肪酶的组织匀浆的操作过程是：组织匀浆的制备开始先取组织块在冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭干，称重，大约于0.200g左右放置于研钵中，在冰浴条件下，按要求加相应比例的生理盐水进行研