PCR技术检测结核分支杆菌DNA诊断关节结核的临床研究及其应用.pdf

PcR技术检测结核分支杆菌DNA诊断关节结核的 临床研究及其应用 摘要 背景：关节结核是临床常见病多发病，造成关节结构的严重 破坏，导致关节功能障碍，甚至残畸。(其好发于儿童与青少年， 严重地影响着生长发育。WHO资料表明，近几十年来结核病发病 率呈逐年上升趋势。因而关节结核严重地威胁着人类的健康。早 期治疗是防治关节结构破坏、挽救关节功能的主要措施，而早期 治疗的关键在于早期诊断。但是，关节结核起病隐匿，发展缓 慢，早期临床表现缺乏特征性，影像学检查缺乏特异性，待出现 典型的临床表现时已发展到晚期。因而其早期诊断依赖于细菌学 检查。然而，传统的结核病细菌学检查在敏感性、特异性及检出 速度等方面都存在严重的问题，远不能满足关节结核现代诊疗的 Chain 需要了PCR(Poly7meraseReaction，PCR)技术以快速、敏 感、特异而简便等优点将结核病的诊断提高到基因与分子水平， 广泛用于肺结核与结核性脑膜炎的诊断-9鉴别诊断，取得了令人 鼓舞的结果．(但是应用PCR技术诊断关节结核方面的报道很少， 而且多数为散在性的个案报道，或者研究存在较多缺陷，缺乏科 学的设计及科学的评价，应用临床流行病学的原理及方法科学地 研究和评价PCR技术检测结核分支杆菌DNA对诊断关节结核的临 床应用价值方面的文献，国内外未见报道。≯～ 目的：研究PCR技术对关节结核标本结核分支杆菌DNA检测 的临床价值，为关节结核的早期快速诊断与鉴别诊断建立一种快 速、敏感、特异而简便的细菌学诊断方法． (材料与方法：对5份结核分支杆菌标准菌株和5份BCG-与10份 非结核分支杆菌细菌分别应用PCR技术盲法检测结核分支杆菌 DNA．对85例关节结核标本和80例非关节结核标本分别应用PCR l DNA。对85例关节结核标本和80例非关节结核标本分别应用PCR 技术、抗酸染色镜检及分离培养法盲法检测结核分支杆菌。研究 分两个阶段进行：第一阶段以一个JJ,样本检验PCR技术在关节结 核标本结核分支杆菌检测方面是否优于传统的镜检及培养法。同 时估计PCR技术检测关节结核标本结核分支杆菌DNA敏感性与 特异性，并据此确定本研究所需要的样本量。第二阶段以一个大 样本以临床流行病学方法评价PCR技术检测关节结核标本结核分 支杆菌DNA诊断关节结核的临床价值。 结果：20份盲法测试标本经PCR扩增后结核分支杆菌和卡介 苗均为阳性，而其他细菌均为阴性，此显示本研究中PCR技术 “特异性”为100％，“敏感性”为100％。在本研究的第一阶 段，对30例关节结核标本和20例非关节结核标本分别应用PCR技 术、抗酸染色镜检及分离培养法检测结核分支杆菌．结果30例关 节结核标本q,ecR技术阳性26例，阳性率87％；镜检法阳性0例， 阳性率0；培养法阳性4例，阳性率13％。20例非关节结核标本镜 检及培养法均阴性，PCR技术阳性2例，阳性率10％。此表明PCR 技术在关节结核标本结核分支杆菌检测方面明显优于镜检及培养 法(PO．005)，其估计敏感度为87％，估计特异度为90％。据此 确定本研究所需样本量为：关节结核组n，=68，非关节结核组n2． 55。在第二阶段，85例关节结核标本三种方法的检出结果分别 为：PCR技术：阳性72例，阳性率85％；镜检法：阳性3例，阳性 率4％；培养法：阳性12侧，阳性率14％。80侧非关节结核标本镜 检及培养法均阴性，PCR技术阳性7例，阳性率9％。PCR技术检测 关节结核标本结核分支杆菌DNA的敏感性为85％，特异性为91 ％，准确性为88％，阳性预测值为91％，阴性预测值为85％。 PCR技术与镜检法及培养法对于结核分支杆菌的阳性检出率比 较，差异具有显著性意义(PO．001)，PCR技术明显优于镜检 及培养法。PCR扩增整个过程自动化控制，可在数小时内完成．-k 2 ／ 结论：旦噬查是一种快速、敏感、特异而简便的关节结核 标本结核分支杆菌DNA检测方法，明显优于镜检及培养法，对于 关节结核的早期快速诊断与鉴别诊断具有极其重要的价值。但 是，它也有一定的局限性，主要表现在假阳性与假阴性两个方 面。 关