牛奶子果实成熟过程上调蛋白表达谱及IPI基因全长的克隆与分析.pdf

曩 l I一 ■ S I■ ● 广 0、二，． o ．糟 l 产 ▲ ＼1 P - 本研究得到浙江省科技厅 Theresearchwasfundedthe by Scienceand Technology of Department Zhejiang 、 ， - ．一 ．墨／l， F～ ● 厂 气 Ⅷ 《 ^，咄I一 牛奶子果实成熟过程上调蛋白表达谱及删基因全长的克隆 与分析 摘要 umbellata 牛奶子(ElaeagnusThunb．)果实富含人体所需多种氨基酸、矿质 元素、维生素、必需脂肪酸、类黄酮、番茄红素等物质，是一种极具开发潜力的 天然抗氧化剂和营养补充剂。它不仅可作为水果直接食用，而且其提取物更具抗 癌等药用价值，同时还有可能成为番茄的替代品用于工厂化生产番茄红素，综合 开发利用前景广泛。 由于牛奶子是野生植物，对其果实的生长发育尚不了解。为此，我们以 Bio．Rad高通量双向电泳系统为技术平台，通过改进和优化牛奶子果实蛋白的提 取方法及电泳条件，首次建立了一套适合牛奶子果实总蛋白的高分辨率和重复性 好的双向电泳体系，用以研究牛奶子果实成熟过程蛋白组变化，结合相关有机物 的测定，来探讨果实成熟的分子机制。此后，我们从上调蛋白中选择了一个萜类 物质合成的关键酶——异戊烯焦磷酸异构酶(IPI)，克隆得到了基因全长。结果 如下： 1．用酚法提取蛋白时，适当延长第2次平衡时间，并及时更换平衡缓冲液 II，可获得高分辨率的总蛋白图谱。这种改良了的方法解决了牛奶子果实中富含 的色素和多酚等次生代谢物对双向电泳(2．DE)的干扰问题，重复性好，适用 于果实中蛋白的2-DE分析和尔后的技术操作。 2．果实成熟是一个复杂的生理生化过程，包括糖类合成、有机酸代谢和类胡 萝卜素积累等。在成熟的牛奶子果实中，葡萄糖和果糖为主要糖存在形式；苹果 酸为最丰富的有机酸；番茄红素含量高达2345 pg儋干重，相当于传统番茄的17 倍。利用2-DE技术筛选出63个上调表达蛋白，采用串联质谱技术成功鉴定出 其中的43个，38个已知功能蛋白参与果实